miR-27a通过靶定HLX调控宫颈癌细胞的恶性行为

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研究目的:微小RNA(miRNA)是通过与靶mRNA特异性的碱基配对结合对靶基因进行转录后调控的一类非编码单链小分子RNA,miRNA对靶基因的调控包括负性调控和正性调控,但目前尚未弄清正性调控的机制。miRNA对细胞的作用包括多种生命过程如生长、增殖,凋亡,脂肪代谢和造血细胞的分化等。宫颈癌是最常见的妇科恶性肿瘤之一,近年来其发病率呈年轻化趋势,严重威胁女性健康。肿瘤的发生发展是多因素,多步骤的复杂过程,宫颈癌也不例外。近年来又发现宫颈癌组织及血清中miRNA表达有差异,miRNA可能参与了宫颈癌的发生与发展。本课题主要研究micro RNA-27a及其靶基因H2.0-like homeobox HLX)在宫颈癌细胞中的作用及其作用机制。研究方法:为了研究miR-27a在宫颈癌细胞He La中的作用,我们采用了MTT比色法,克隆形成实验和Transwell迁移、侵袭等实验方法。通过生物信息网站预测了miR-27a几个潜在靶基因,挑选出其中与肿瘤生长相关的靶基因HLX作为研究对象,利用荧光报告载体实验、qRT-PCR和Western blot技术验证miR-27a对靶基因HLX作用的直接性及其调控方式。然后同样通过MTT,平板克隆形成实验,Transwell迁移和侵袭实验研究了靶基因HLX在He La细胞中的作用,最后通过MTT比色法,克隆形成实验和Transwell迁移、侵袭实验的挽救实验进一步证明miR-27a通过其靶基因HLX影响宫颈癌细胞的恶性行为。研究结果:过表达miR-27a促进He La细胞的生长,迁移和侵袭,通过生物信息学对靶基因的预测,miR-27a的候选靶基因是H2.0-like homeobox(HLX),HLX的3UTR区域有miR-27a的结合位点,采用荧光报告系统验证了HLX 3UTR确实存在miR-27a的靶位点,qRT-PCR和Western blot进一步验证了miR-27a可以上调内源性HLX的表达。靶基因功能研究表明,过表达HLX同样促进He La细胞的生长,迁移和侵袭。结论:在宫颈癌细胞He La中,miR-27a通过上调其靶基因HLX影响宫颈癌细胞的生长,迁移和侵袭。
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