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目的:本研究通过对大鼠建立慢性心力衰竭模型后,灌服益气活血复方及赖诺普利片,探究慢性心衰时,益气活血复方对大鼠心肌能量代谢的影响,以核呼吸因子-1(NRF-1)、线粒体转录因子A(mt TFA)、三磷酸腺苷(ATP)为依据,探讨其相关作用机理及靶点,为祖国医学防治慢性心力衰竭提供科学依据及实验方法。材料与方法:1建立慢性心力衰竭大鼠模型:选用SPF级12周龄健康SD大鼠,雄性,80只,体重在250±10g。通过结扎左冠状动脉前降支,配合力竭式游泳及节食的方法建立慢性心力衰竭大鼠模型。冠状动脉结扎期间动态心电图显示胸前导联ST段抬高,造模后经心脏超声计算左室射血分数(EF值)≤50%作为慢性心衰造模成功的标志。此时模型大鼠伴有精神萎靡,爪背瘀斑、水肿、脱毛、喉间水泡音等体征辨为气虚血瘀水停证。2实验动物的分组:将43只造模成功的大鼠采用随机数字表求余法分为:模型组(14只)、中药组(15只)、西药组(14只)。此时,正常组(假手术组)亦随机留取15只以尽量控制各组的样本量持平衡状态。3实验用药:益气活血复方组成:黄芪、太子参、红花、丹参、益母草、茯苓、葶苈子。由辽宁中医药大学附属医院药剂中心提供和制备。西药赖诺普利片由上海信谊万象药业股份有限公司生产,规格为每片10mg,批号为:HI0960265。4实验给药剂量:正常组和模型组大鼠,每日给予等容积蒸馏水灌胃,中药组按生药9.2g/(kg.d)的剂量给予益气活血复方灌胃,西药组按生药1.5mg/(kg.d)的剂量给予赖诺普利片灌胃,持续给药28d。5实时定量荧光PCR技术测定各组大鼠心肌组织中NRF-1、mt TFA m RNA的表达水平。6蛋白免疫印迹技术(Western blot)观察各组大鼠心肌组织中NRF-1、mt TFA蛋白表达的变化,并测定平均灰度值。7比色法测定ATP的浓度水平,ELISA法测定BNP的浓度水平。8镜下观察心肌细胞内线粒体变化。结果:1与正常组(假手术组)比较,治疗组(中药组、西药组)及模型组中BNP浓度均升高,P=0.000(P<0.01),组间差异显著,提示心衰时心肌组织内BNP的含量呈现升高趋势。治疗组与模型组比较,治疗组中BNP浓度降低,P=0.000(P<0.01),组间差异显著,说明本实验药物治疗能够减少BNP的产生;中药组与西药组中BNP浓度比较,P=0.691(P>0.05),组间差异无统计学意义,说明中、西药物的疗效相当。2与正常组比较,治疗组及模型组中ATP浓度均减低,P=0.000(P<0.01),组间差异显著,提示心衰时心肌组织中ATP的含量呈现降低趋势。与模型组比较,治疗组中ATP浓度均升高,P=0.000(P<0.01),组间差异显著,说明本实验药物治疗能够提高心肌组织中ATP的含量,促进能量的释放;中药组与西药组ATP浓度比较,P=0.159(P>0.05),组间差异无统计学意义,说明中、西药物的疗效相当。3与正常组比较,治疗组及模型组中NTF-1、mt TFA m RNA的表达及蛋白表达均降低,P=0.000(P<0.01),组间差异显著,提示心衰时心肌组织内NTF-1、mt TFA的含量呈现降低趋势。与模型组比较,治疗组中NTF-1、mt TFA m RNA的表达及蛋白表达均升高,P=0.000(P<0.01),组间差异显著,说明治疗组的药物能够提高心肌组织中NTF-1、mt TFA的含量,提示本实验药物治疗能够增加线粒体的生成;中药组与西药组NTF-1、mt TFA m RNA的表达及蛋白表达比较,P=0.890(P>0.05),组间差异无统计学意义,说明中、西药物的疗效相当。4观察电镜下心肌内线粒体发现:正常组大鼠心肌细胞内线粒体数量丰富,形态大小相当,线粒体内脊等结构清晰可见,线粒体外膜光滑无损伤,线粒体无肿胀;模型组大鼠心肌细胞内线粒体数量相对减少,形态大小不规则,线粒体肿胀,线粒体内脊等结构纹理紊乱不清,甚至形成只有线粒体框架结构的空泡,线粒体外膜损伤,甚至发生破裂;西药组大鼠心肌细胞内线粒体数量较模型组增多,但仍较正常组少,虽然存在大小不规则等异常形态线粒体,但是线粒体总体形态大小相当,空泡等异常线粒体结构较模型组减少;中药组大鼠心肌细胞内线粒体数量较西药组少,但多于模型组,其线粒体空泡化、肿胀变形、脊紊乱等异常结构较模型组减少。说明,益气活血复方能够优化线粒体的生成,改善线粒体结构异常,且西药组与中药组疗效相当。结论:1通过比较各组数据,发现ATP的含量以及NRF-1、mt TFA的表达在慢性心衰的过程中降低,说明心衰发生时存在着线粒体能量代谢障碍。2通过各组间比较,镜下线粒体的微观结构有所改变,证明在心衰时存在线粒体异常破坏,通过与模型组的比较,本实验药物对线粒体的生成有良好的疗效。3通过各组间结果比较,证明益气活血复方是能够改善心肌能量代谢的方药,通过增加NRF-1、mt TFA的表达,增加线粒体的生成和ATP产能,起到改善心肌能量代谢,调节心肌内能量重构的作用。