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目的:甲状腺肿(Goiter)是指甲状腺的体积和形态的增大。目前对于环境因素对甲状腺肿的作用研究较多。而对于遗传因素在甲状腺肿发生中的作用研究较少。TNF、PDE8B、TSHR的基因多态性与甲状腺功能和碘代谢密切相关,它们可能与环境因素共同作用,导致甲状腺肿的发生。本次研究通过对吴桥县5个乡镇的8~10岁儿童甲状腺肿患病率的调查,并采集血液标本进行实验室研究,旨在探讨TNF、PDE8B、TSHR的基因多态性与儿童甲状腺肿的关系。揭示遗传易感性在甲状腺肿发生中的作用。方法:从吴桥县东、西、南、北、中不同方向随机抽取5乡(镇),每个乡(镇)按东、西、南、北、中不同方向随机抽取5个村,对抽到的25个村展开调查。调查对象为8-10岁在校儿童1209名。采用甲状腺触诊法检查,诊断标准按WS276—2007(地方性甲状腺肿的诊断与分度标准),由2名具有一定经验的专业人员共同确定。本次调查共发现甲状腺肿大儿童74例,肿大率为6.1%。同时随机选择健康儿童146例,作为正常对照组。分别抽取静脉血5ml,胍盐酸法提取全血基因组DNA。首先运用聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction,PCR)扩增目的片段,并对目的片段进行测序,确定标本TNF308(rs1800629) A/G、PDE8B(rs4704397) A/G和TSHR(rs2268458) C/T基因型,然后运用高分辨率熔解曲线法(High Resolution Melt,HRM)分析确定每个样本TNF308(rs1800629) A/G、PDE8B(rs4704397) A/G和TSHR(rs2268458) C/T基因型,最后分析基因多态性和甲状腺肿的关系。同时检测甲状腺的主要功能指标包括血清游离三碘甲腺原氨酸(Free Triiodothyronine,FT3)、血清游离甲状腺素(free thyroxine,FT4)和促甲状腺激素(thyrotropin,thyroid stimulating hormone,TSH)三项生化指标。对所有计量资料进行正态性检验,Hardy-Weinberg平衡法检验各组基因频率的群体代表性。正态分布的资料以均数±标准差(—x±s)表示;非正态性分布资料以中位数(最小值,最大值)表示。计量资料的组间比较用t或t′检验;计数资料组间比较用x2检验;甲状腺肿发生的危险因素用Logistic回归分析。全部数据信息通过Excel2003建立数据库,用SPSS13.0统计软件包对数据库进行处理分析。结果:(1)本次调查1209名在校儿童,共发现甲状腺肿大儿童74例,肿大率为6.1%。甲状腺肿大儿童的平均年龄、性别构成比与正常对照组的平均年龄、性别构成比无明显差异(p>0.05);FT3、FT4、TSH三个指标在对照组与甲状腺肿大组两组间差别无统计学意义(p>0.05)。(2)TNF基因型及两种等位基因在两组中的分布:甲状腺肿大组和正常对照组的TNF基因均存在A、G两种等位基因和GA、GG两种基因型,将各实际观察值代入Hardy-Weinberg平衡公式,先计算出各种基因型个体的理论值,用X2检验检测各基因型的理论预期值与实际测得值之间的吻合程度进行验证。检验结果显示:各组X2值均小于3.84(X20.05=3.84,df=1),即p值均大于0.05,说明实际基因频率与期望基因频率的差异没有统计学意义,其分布符合Hardy-Weinberg平衡,具有群体代表性。正常对照组和甲状腺肿大组的GG基因型频率分别为90.41%和91.89%,差别无统计学意义(p>0.05);正常对照组和甲状腺肿大组的G基因型频率分别为95.21%和95.95%,差别无统计学意义(p>0.05)。利用GA和GG基因型在两组的分布情况计算得到OR=0.83,95%CI为0.30-2.29,说明不同基因型在地方性甲状腺肿患病率没有差别。利用A和G基因型在两组的分布情况计算得到OR=1.19,95%CI为0.44-3.18,说明不同等位基因在地方性甲状腺肿患病率没有差别(3)PDE8B基因型及两种等位基因在两组中的分布:甲状腺肿大组和正常对照组的PDE8B基因均存在A、G两种等位基因和AA、AG两种基因型,将各实际观察值代入Hardy-Weinberg平衡公式,先计算出各种基因型个体的理论值,用X2检验检测各基因型的理论预期值与实际测得值之间的吻合程度进行验证。,检验结果显示:各组X2值均小于3.84(X20.05=3.84,df=1),即p值均大于0.05,说明实际基因频率与期望基因频率的差异没有统计学意义,其分布符合Hardy-Weinberg平衡,具有群体代表性。正常对照组和甲状腺肿大组的AG基因型频率分别为20.55%和33.78%,差别有统计学意义(p<0.05),甲状腺肿大组的AG基因型频率显著高于正常对照组;正常对照组和甲状腺肿大组的G基因型频率分别为10.27%和16.89%,差别有统计学意义(p<0.05),甲状腺肿大组的G等位基因型频率显著高于正常对照组。利用AA和AG基因型在两组的分布情况计算得到OR=1.97,95%CI为1.06-3.66,说明AG基因型患地方性甲状腺肿的危险性是AA基因型患地方性甲状腺肿的1.97倍。利用A和G基因型在两组的分布情况计算得到OR=1.76,95%CI为1.01-3.08,说明G等位基因携带者患地方性甲状腺肿的危险性是A等位基因携带者患地方性甲状腺肿的1.76倍。(4)TSHR基因型及两种等位基因在两组中的分布:甲状腺肿大组和正常对照组的TSHR基因均存在C、T两种等位基因和CC、CT、TT三种基因型,将各实际观察值代入Hardy-Weinberg平衡公式,先计算出各种基因型个体的理论值,用X2检验检测各基因型的理论预期值与实际测得值之间的吻合程度进行验证。,检验结果显示:各组X2值均小于3.8(4X20.05=3.84,df=1),即p值均大于0.05,说明实际基因频率与期望基因频率的差异没有统计学意义,其分布符合Hardy-Weinberg平衡,具有群体代表性。正常对照组和甲状腺肿大组的TT基因型频率分别为15.75%和13.51%,差别无统计学意义(p>0.05);正常对照组和甲状腺肿大组的T基因型频率分别为32.53%和31.08%,差别无统计学意义(p>0.05)。利用CC、CT、TT三种基因型在两组的分布情况计算得到OR=1.20,95%CI为0.53-2.73,说明不同基因型在地方性甲状腺肿患病率没有差别。利用C和T基因型在两组的分布情况计算得到OR=1.07,95%CI为0.70-1.63,说明不同等位基因在地方性甲状腺肿患病率没有差别。(5)地方性甲状腺肿危险因素分析:以有无地方性甲状腺肿(EG)为因变量, TNF基因型、PDE8B基因型、TSHR基因型、FT3、FT4、TSH为自变量,采用多因素非条件Logistic回归分析研究多因素对EG发病的影响,结果显示只有PDE8B基因多态性(OR=2.03,95%CI为1.06-3.88)和TSH(OR=2.23,95%CI为1.14-4.37)是地方性甲状腺肿的危险因素,另有一项FT4 (OR=0.42,95%CI为0.21-0.84)是地方性甲状腺肿的保护因素。结论:(1) PDE8B(rs4704397) A/G基因多态性与地方性甲状腺肿的发生有关, G等位基因可能是地方性甲状腺肿的易感基因。(2)TNF308(rs1800629)A/G基因多态性与地方性甲状腺肿的发生无相关性。(3) TSHR(rs2268458) C/T基因多态性与地方性甲状腺肿的发生无相关性。