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研究目的初步探讨白藜芦醇(resveratrol,简称Res)对核仁功能的影响和其如何通过PI3K/Akt这个信号通路来影响核仁功能的。方法和结果1.通过MTT、细胞克隆形成和DAPI染色技术检测Res对细胞增殖率、克隆形成和细胞凋亡的影响,结果表明100μmol/L的Res作用48h即可以抑制HeLa细胞的增殖和克隆形成,并在400μmol/L及其以上浓度时完全抑制HeLa细胞的增殖和克隆形成。2.通过Luciferase Assay技术、CHIP技术和Realtime PCR技术检测Res对HeLa细胞内rDNA启动子活性、HeLa细胞内转录因子在rDNA上的富集倍数和pre-rRNA表达的影响,结果表明:Res作用3h后即可抑制HeLa细胞内rDNA启动子活性;Res作用12h后,随着浓度的增加,转录因子UBF和RNA聚合酶I的亚基RPA194在rDNA上的富集倍数逐渐降低,换言之,即转录因子UBF和RNA聚合酶的亚基RPA194的活性降低;12h后对pre-rRNA的表达量相对不加药组抑制率达70%左右,并呈现浓度和时间依赖趋势。3.通过Western Blotting技术检测Res对和PI3K/Akt信号通路上的主要成员的表达及活化情况,结果表明:随着浓度的增加和作用时间的延长,HeLa细胞内PI3K/Akt这个信号通路上主要成员UBF和Akt的表达无较大改变,但其活化水平显著降低,并呈现浓度和时间依赖趋势;与抑制剂PI3Kα、PI3Kβ和Ly294002抑制效果的结果比较表明:抑制剂PI3K a的抑制效果最好,这就说明PI3K/Akt信号通路上的,起主要作用的是启始位点的PI3Kα亚型。4.通过Luciferase Assay技术、CHIP技术、Realtime PCR技术和Western Blotting技术检测Res对PI3K α亚型活化后的HeLa细胞的影响,结果表明:Res可以抑制PI3K/Akt信号通路活化后rDNA启动子的活性,降低RNA聚合酶I的亚基RPA194的活性,下调pre-rRNA的表达,抑制PI3K/Akt这个信号通路上主要成员UBF和Akt的活化。结论Res能有效抑制HeLa细胞的增殖并促进HeLa细胞的凋亡,降低rDNA启动子的活性,降低转录因子UBF和RNA聚合酶I的亚基RPA194的活性,下调pre-rRNA的表达水平,降低PI3K/Akt信号通路中UBF与Akt的磷酸化水平,对完全活化的PI3K α亚型亦有明显的抑制作用。