论文部分内容阅读
抑郁症是一种常见的精神疾病。以显著而持久的情绪低落、思维迟缓和意志活动减退为主要特征。抑郁症具有很高的致死致残率。抑郁症严重危害患者的身心健康和生活质量,同时给患者家属带来巨大的精神和经济负担。也能给社会造成经济负担。抑郁症的发病与遗传、生物、心理、社会等多种因素有关。近年来,细胞信号转导通路在抑郁症发病与抗抑郁药物治疗中的作用受到越来越多的关注。大量的文献报道,抑郁症针刺治疗疗效肯定。其作用机制与针刺能够调节神经内分泌和免疫系统功能紊乱有关。针刺对抑郁模型大鼠脑内信号转导通路影响的研究也逐渐增多。但针刺与抗抑郁药物对细胞信号转导通路影响的差异性研究尚未报道。本研究拟选择精神药理学行为绝望强迫游泳动物模型,以行为学和JNK通路上与抑郁-应激关系密切的主要效应因子、促炎性细胞因子、HSP70为观察指标,观察在JNK信号通路阻断剂SP600125作用下针刺与氟西汀的抗抑郁作用的有效性,探讨针刺与氟西汀对模型大鼠脑内JNK信号通路影响的差异性。研究方法1分组将旷场实验和糖水实验行为学评分近似,体重170±10g的48只SD大鼠,按照随机数字表分成正常组、正常+SP600125组(以下简称SP)、模型组、模型+SP组、针刺组、针刺+SP组、氟西汀组、氟西汀+SP组,每组6只。2造模方法选择模拟抑郁症病人行为绝望的强迫游泳应激模型。将大鼠放置盛有水温24±1℃自来水的透明玻璃缸中行强迫游泳应激15min.24h后再次进行强迫游泳6min,记录其后5min内游泳不动时间。用游泳不动时间评价行为学。3干预方法正常组不给予任何干预。正常+SP组,仅腹腔注射SP600125(用DMSO溶解后,按10mg/kg腹腔注射)。模型+SP组,造模前30min腹腔注射SP600125。针刺组,造模前1h,取“百会”、“印堂”穴,用“百会透刺印堂”法留针20min。针刺+SP组,针刺穴位、方法及时间与针刺组相同,但针刺前30min腹腔注射SP600125。氟西汀组,造模前1h灌胃给药,按1.8mg/kg,用蒸馏水配成氟西汀溶液,按10ml/kg灌胃。氟西汀+SP组,给药剂量和方法与氟西汀组相同,但给药前30min腹腔注射SP600125。4检测指标及方法用ELISA方法检测大鼠血清与海马内促炎性细胞因子IL-1βIL-6, TNF-a, HSP70的含量。Western blot法检测海马内MKK4, MKK7, JNK, p-JNK, c-jun的含量。RT-PCR方法检测海马内Caspase-3基因的表达。研究结果1行为学变化正常组与正常+SP组大鼠游泳不动时间没有显著差异(P>0.05)；与正常组比较,模型组大鼠游泳不动时间显著增加(P<0.01)；与模型组比较,模型+SP组、针刺组、针刺+SP组、氟西汀组、氟西汀+SP组大鼠游泳不动时间明显降低(P<0.05,P<0.01,P<0.01,P<0.01,P<0.01)；模型+SP组、针刺组、针刺+SP组、氟西汀组、氟西汀+SP组之间比较差异性没有统计学意义(P>0.05)。2血清与海马IL-1β、IL-6、TNF-a含量各组大鼠血清与海马内IL-1β、IL-6、TNF-a含量变化趋势基本一致。正常组与正常+SP组之间比较,血清与海马内IL-1β、IL-6、TNF-含量无显著差异(P>0.05)：与正常组比较,模型组大鼠血清与海马内IL-1β、IL-6、TNF-a含量均显著增加(均P<0.01)；与模型组比较,模型+SP组、针刺组、针刺+SP组、氟西汀组、氟西汀+SP组大鼠血清与海马内IL-1β、IL-6、TNF-a含量含量均显著降低(均P<0.01)；模型+SP组、针刺组、针刺+SP组、氟西汀组、氟西汀+SP组各组之间均有显著差异(均P<0.01),氟西汀的降低作用优于针刺(P<0.01)。3海马内MKK4、MKK7的含量正常组与正常+SP组之间比较,海马组织中MKK4、MMK7的含量无显著差异(P>0.05)；与正常组比较,模型组大鼠海MMK4、MMK7著增加(均p<0.01)；与模型组比较,氟西汀+SP组MKK4和MMK7含量降低比较明显(P<0.05),模型+SP组、针刺组、针刺+sβ组、氟西汀组大鼠海马MKK4、MMK7含量虽有降低趋势,但差异性没有统计学意义(均P>0.05)；针刺组与氟西汀组之间比较没有显著差异(P>0.05)。4海马JNK.p-JNK含量海马JNK含量不同组别之间没有显著差异((均P>0.05)。海马β-JNK表达水平,正常组与正常+SP组之间无显著差异(P>0.05)；模型组大鼠海马p-JNK表达较正常组显著增加(P<0.01)；与模型组比较,模型+SP组、针刺组、针刺+sβ组、氟西汀组、氟西汀+SP组大鼠p-JNK表达显著降低(P<0.05、P<0.01、P<0.01、P<0.01、P<0.01)；针刺组与氟西汀组之间比较无显著差异(P>0.05)。5海马c-jun的含量海马c-jun含量,正常组与正常+SP组之间无显著差异(P>0.05)；模型组大鼠海马c-含量较正常组明显增加(P<0.01)；与模型组比较,模型+SP组、针刺组、针刺+sβ组、氟西汀组、氟西汀+SP组c-jun含量明显降低(P<0.05,P<0.05,P<0.01,P<0.01,P<0.01)；氟西汀的降低作用较针刺更明显(P<0.05)。6海马Caspase-3基因表达正常组与正常+SP组大鼠海马内Caspase-3基因表达无显著差异(P>0.05);模型组大鼠海马Caspase-3基因表达较正常组明显增加(P<0.01)；与模型组比较,模型+SP组、针刺组、针刺+SP组、氟西汀组、氟西汀+SP组大鼠海马Caspase-3基因表达均明显降低(均P<0.01)；氟西汀的降低作用优于针刺(P<0.01)。7血清与海马HSP70含量大鼠血清与海马HSP70表达,正常组与正常+SP组之间无显著差异(P>0.05)；模型组大鼠血清与海马内HSP70表达较正常组明显增加(均P<0.01)；与模型组比较,模型+SP组、针刺组、针刺+SP组、氟西汀组、氟西汀+SP组大鼠血清与海马HSP70表达明显降低(均P<0.01)；氟西汀的降低作用优于针刺(P<0.01)。结论1强迫游泳应激使大鼠出现行为绝望状态,增加游泳不动时间。针刺与氟西汀干预均能有效改善模型大鼠行为学变化。2强迫游泳应激增加大鼠血清与海马IL-1β、IL-6、TNF-a的分泌。针刺与氟西汀干预均能有效降低模型大鼠血清与海马IL-1β、IL-6、TNF-a的过度分泌。3强迫游泳应激激活大鼠海马JNK信号通路,提高JNK的磷酸化水平。针刺与氟西汀均能降低模型大鼠海马JNK的磷酸化水平,有效抑制模型大鼠脑内JNK信号通路活性。4强迫游泳应激增加大鼠海马c-jun和Caspase-3基因的表达。针刺与氟西汀均能显著降低模型大鼠海马c-jun和Caspase-3基因的表达。5强迫游泳应激增加大鼠血清与海马HSP70含量。针刺与氟西汀干预使模型大鼠血清与海马HSP70含量趋于正常水平。6SP600125对正常生理状态下大鼠行为学、促炎性细胞因子、JNK通路主要效应因子、HSP70的表达没有影响。而对强迫游泳应激模型大鼠的行为学变化有显著改善作用。同时,明显降低模型大鼠促炎性细胞因子的分泌,抑制海马JNK的磷酸化水平,降低c-jun和Caspase-3基因的表达,下调海马内HSP70高表达。7针刺与氟西汀对强迫游泳应激模型大鼠行为学的改善作用无显著差异。对模型大鼠血清与海马促炎性细胞因子、c-jun、 Caspase-3基因以及HSP70的调节作用二者存在差异性,氟西汀优于针刺。