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目的: 通过检测干细胞因子受体(c-Kit)在骨质疏松症小鼠骨组织中的表达,初步探寻c-Kit在骨质疏松症发病中的作用,为进一步探寻骨质疏松症的防治方法提供实验依据。 方法: 1.实验动物及分组:选取30只3月龄雄性SPF级C57BL/6J小鼠,体重30±5g。随机分为3组:A组:正常组(10只),给予生理盐水90ml/kg灌胃,每日1次,连续14日;B组:骨质疏松组(10只),给予维甲酸90mg/kg灌胃,每日1次,连续14日;C组:骨质疏松基础治疗干预组(10只),给予维甲酸90mg/kg、葡萄糖酸钙1g/kg灌胃,维生素D3注射液0.025ug/Kg皮下注射,每日1次,连续14日。造模结束后取材。 2.研究方法:通过Micro-CT扫描检测骨体积分数、骨小梁数目、骨小梁厚度、骨小梁分离度等骨质量和骨形态相关参数。通过组织病理学切片观察骨形态学变化。采用免疫组织化学技术,利用激光扫描共聚焦显微镜观察c-Kit受体在小鼠骨组织中的表达。实验数据的统计分析采用SPSS19.0统计软件进行,计数资料描述使用均数±标准差(x?s)表示,组间比较采用卡方检验或单因素方差的方法进行分析,P<0.05表示差异具有统计学意义。 结果: 1. MicroCT扫描小鼠股骨结果显示: C组骨体积分数(BV/TV)、骨小梁数目(TB.N)低于A组,高于B组,差异均具有统计学意义(P<0.05)。C组骨小梁厚度(TB.Th)明显低于A组,高于B组,差异均无统计学意义(P>0.05)。骨小梁分离度(TB.SP)B组较A组明显增加,且高于C组,差异均具有统计学意义(P<0.05)。 2.组织病理切片HE染色结果: A组小鼠股骨上端骨密质较厚且均匀,骨小梁均匀,骨结构紧密,连续性较好。B组小鼠骨密质变薄,骨细胞变少且排列紊乱,骨小梁变薄、稀疏、纤细、断裂,骨髓腔扩大。骨质疏松基础药物治疗后C组小鼠股骨骨密质较B组明显增厚,骨小梁连续、变粗、变密。 3.组织病理切片Masson染色结果显示: B组与 A组相比较,软骨及骨质胶原着色状况无明显改变,可见骨小梁连接性差、分离度大。C组的新生骨基质较B组明显增多,骨形成活跃,软骨及胶原纤维呈蓝色,骨质呈蓝色间杂以红色条块,新生骨质内红染少,成熟骨内红染较多。 4. c-Kit在小鼠骨组织中的表达: 免疫组化结果采用半定量积分法判定,阳性细胞比例×阳性细胞染色评分=免疫组化评分,阳性表达得分≥2,阴性表达得分<2。A组骨细胞可见多处密布存在的c-Kit表达阳性细胞,颜色呈棕黄色至棕褐色。B组骨细胞可见极少量的浅黄色的c-Kit表达阳性细胞,而C组可见散在分布的c-Kit表达阳性细胞,颜色多为棕黄色颗粒。B组c-Kit在骨细胞中的表达与A组相比较明显降低(P<0.05)、与C组相比较明显降低(P<0.05),C组c-Kit在骨细胞中的表达与A组相比较明显降低(P<0.05)。 结论: 1. c-Kit在正常小鼠骨组织中有表达,骨质疏松症小鼠骨组织C-kit表达减低,应用骨质疏松基础治疗后表达可上调。 2.c-Kit可能在骨质疏松症的发病中起重要的调节作用,进一步对骨质疏松症病因学研究提供依据,为临床治疗骨质疏松症提供思路。