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背景和目的： EB病毒（Epstein-Barr virus，EBV）是重要的DNA肿瘤病毒，与多种人类淋巴和上皮细胞性肿瘤的发生有关，鼻咽癌（nasopharyngeal carcinoma，NPC）是所有EBV相关肿瘤中与EBV关系最为密切的肿瘤。我们前期在检测EBV编码小RNA （EBV-encoded small RNAs，EBERs，包括EBER1和EBER2）多态性时发现EBER1基因高度保守，但部分标本在EBER2基因出现6个共有突变，且在EBER2出现共有突变的变异型EB-8m在NPC中的检出率高于健康人群，尤其是高发区NPC中检出率高达82%，提示该变异型与NPC的发生相关。EBERs是所有EBV潜伏类型中表达最为丰富的非编码RNA，其致癌作用已在多种细胞系中证实，因此EBERs在EBV相关肿瘤中可能发挥重要作用。本研究旨在明确EB-8m变异型对其致癌潜能的影响，并初步分析和探讨EB-8m变异型改变NPC细胞生物学行为的机制，为阐明EBERs参与NPC的发生机制提供实验依据。 方法： 1.构建EBER基因原型EB-B95-8和变异型EB-8m慢病毒表达载体，分别转染EBV阴性NPC细胞系CNE1，嘌呤霉素筛选，qRT-PCR鉴定目的基因表达获得EBER原型和变异型基因稳定转染细胞。 2.以对照病毒转染细胞为对照，检测EBER原型和变异型基因对CNE1细胞生物学行为的影响，主要包括MTT检测细胞增殖能力、饥饿耐受能力；平板克隆和软琼脂细胞集落形成实验检测细胞增殖和集落形成能力；流式细胞术检测细胞增殖周期；凋亡诱导实验；Transwell （Matrigel）小室检测细胞迁移(侵袭)能力；细胞接种BALB/c裸鼠观察成瘤情况。3. 表达谱芯片检测和筛选转染EBER原型和变异型基因细胞转染前后及转染EBER原型细胞和变异型细胞差异表达基因，对差异表达基因进行功能注释和生物反应通路分析，重点关注与细胞增生、凋亡相关通路。 结果： 1、成功构建EBER基因原型EB-B95-8和变异型EB-8m稳定转染细胞，两种基因在EBV阴性NPC细胞系CNE1中均能有效表达。 2、细胞生物学行为结果： （1）MTT和平板克隆实验表明变异型EB-8m细胞的增殖能力高于原型EB-B95-8和对照组(P<0.05)；原型EB-B95-8与对照组细胞无明显差异； （2）EB-8m细胞周期S期细胞比率高于EB-B95-8和对照组，差异有显著 性(P<0.05)； （3）顺铂诱导凋亡检测，EB-B95-8与对照组细胞存活率无明显差异，但EB-8m细胞存活率高于前两种细胞(P<0.05)；流式细胞术检测早期凋亡结果表明EB-8m细胞可有效抵抗由DDP诱导的早期凋亡，与对照组细胞相比差异显著(P<0.05)；EB-8m 和 EB-B95-8 细胞饥饿耐受能力高于对照组细胞，差异明显(P<0.05)； （4） EB-8m和EB-B95-8细胞迁移能力均高于对照组细胞，差异显著(P<0.05)，EB-8m细胞迁移能力也高于EB-B95-8(P<0.05)；EB-8m细胞侵袭能力明显高于EB-B95-8(P<0.05)和对照组（P<0.05），但EB-8m和对照组之间无明显差异(P<0.05)； （5）细胞软琼脂单克隆形成能力实验显示EB-8m和EB-B95-8细胞集落形成能力高于对照组(P<0.05)； （6）裸鼠致瘤实验：EB-8m细胞荷瘤能力高于EB-B95-8和对照组，差异显著(P<0.05)，但EB-B95-8和对照组相比无明显差别(P<0.05)。 3.基因芯片分析： （1）聚类分析表明EB-B95-8和对照组细胞类聚一簇中，与EB-8m细胞相比有差异。基因差异表达结果显示EB-8m与EB-B95-8及对照的共同差异表达的基因156个。 （2）差异基因主要与细胞周期、细胞周期调控、细胞分裂、DNA修复、RNA转录、细胞凋亡、细胞死亡等生物学过程有关，主要参与p53信号通路、紧密结合通路、细胞周期通路、癌症相关通路、凋亡通路、MAPK信号通路等。 结论： （1）与EBER原型基因比较，EBER2基因变异可增强其致癌潜能。 （2）EBER基因变异型EB-8m过表达可促进NPC细胞系CNE1的增殖、迁移和侵袭能力，提高CNE1抗凋亡、软琼脂中细胞集落形成能力和致瘤能力，导致CNE1恶性表型的增强。 （3）EBER基因变异型EB-8m可能通过调节ATM/ATR、与核酸大分子结合等活动影响细胞增殖和凋亡。