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长白山核桃楸果仁富含营养物质,长期食用对身体有益,且其蛋白质含量仅次于油脂含量,因此研究蛋白性质具有重大意义。本研究旨在开发长白山核桃楸蛋白资源,提高核桃楸的经济价值。本文以核桃楸种仁脱脂粕为原料,采用碱溶酸沉法制备核桃楸种仁分离蛋白。先用考马斯亮蓝法测上清液中蛋白含量,确定最佳酸沉pH为4.9,再经过单因素试验考察碱提pH、温度、时间、料液比对核桃楸种仁分离蛋白提取率和纯度的影响。最终通过正交试验,确定核桃楸种仁分离蛋白碱提最优组合为:碱提pH为9.0,温度为60℃,料液比为1:14,时间为90min。该条件下分离蛋白的纯度可达91.35%。分别采用碱溶酸沉法和Osborne法提取核桃楸种仁分离蛋白、清蛋白、球蛋白和谷蛋白,并分析了四种蛋白的功能性质。测得的清蛋白、球蛋白、谷蛋白和分离蛋白的纯度分别为31.47%、53.89%、89.32%和91.35%。溶解性图谱显示在pH5时各个蛋白溶解度最小,谷蛋白持水性和持油性分别为2.76mL/g和2.02mL/g明显高于清蛋白的1.19mL/g、1.8mL/g,球蛋白的0.63mL/g、1.79mL/g和分离蛋白的2.27mL/g、1.44mL/g。清蛋白和球蛋白的巯基含量高于谷蛋白和分离蛋白,球蛋白的二硫键含量是最高为121.690μmol/g。起泡性、乳化性和乳化稳定性都在pH5.0时最低,而此时的泡沫稳定性最好。氨基酸分析结果显示,核桃楸种仁清蛋白、球蛋白、谷蛋白和分离蛋白中谷氨酸和精氨酸含量较丰富,同时这几种蛋白中含所有人体必需氨基酸。SDS-PAGE图谱显示:清蛋白的分子量主要集中在19~21kDa和30~32kDa,球蛋白的分子量主要为18.5~22kDa、30~33.5kDa和49~56kDa,谷蛋白的分子量在19~21kDa、44~58kDa附近较多,还有22、23、29.9、33、35和44kDa。分离蛋白的分子量分别为23、25、29.9、33.5、44.3、48、55和58kDa。试验以长白山核桃楸种仁分离蛋白为原料,研究长白山核桃楸抗氧化活性肽的工艺条件及其抗氧化活性,为核桃楸蛋白的深加工提供实验数据和理论依据。在单因素试验基础上,采用Box-Benhnken响应面法对影响还原能力的主要因素pH值、温度、加酶量和底物浓度进行研究。确定其最佳工艺参数为:pH7.6,酶解温度50℃,加酶量4510U/g,底物浓度4.6%,时间4h,该条件下其还原能力为0.346,水解度为16.50%。抗氧化活性试验表明,随着分离蛋白酶解产物浓度的增加,其对ABTS自由基、DPPH自由基、羟基自由基和超氧阴离子的清除作用及还原能力逐渐增加。当酶解产物浓度达到0.8mg/mL时,对ABTS自由基的清除率为相同浓度下Vc的100%;当浓度达到1.2mg/mL时,对DPPH自由基的清除率达到相同浓度下Vc的90.08%;当酶解产物浓度达到6mg/mL时,酶解产物的还原能力是Vc的68.61%;浓度继续增加到15mg/mL时,对羟基自由基和超氧阴离子的清除作用分别为Vc的94.56%和46.51%。这说明优化后的核桃楸种仁分离蛋白酶解产物对ABTS和DPPH自由基有较强的清除作用,对羟基自由基和超氧阴离子的清除作用及还原能力比Vc弱。