【摘 要】
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目的 探讨组织工程肌腱种子细胞保存中检测细胞存活率的方法。通过研究肌腱种子细胞深低温保存过程中及保存前后等多个环节的影响因素对细胞存活率的影响,筛选抗冻保护剂、优
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目的 探讨组织工程肌腱种子细胞保存中检测细胞存活率的方法。通过研究肌腱种子细胞深低温保存过程中及保存前后等多个环节的影响因素对细胞存活率的影响,筛选抗冻保护剂、优化冻存前后多个环节的影响因素以提高组织工程化肌腱种子细胞保存过程中的细胞存活率,为组织工程化肌腱保存作好准备。最后对组织工程化肌腱保存作初步尝试。 方法 1.细胞存活率方法学研究:将组织工程肌腱种子细胞悬液平分成两管,其中一管给予反复冻融,将细胞冻死;另一管不冻,再将两管细胞按不同比例混合,采用碘化丙啶(propidium iodine,PI)和双苯并咪唑染料(Hoechst 33342,Ho)荧光染色后流式细胞仪分析研究其量效关系;再采用荧光摄影,图像分析其量效关系。 2.肌腱种子细胞深低温保存的实验研究 (1) 抗冻剂筛选:种子细胞给予三种玻璃化配方保存,半月后给予复温解冻后转小牛血清中20分钟后,分别给予碘化丙啶和双苯并咪唑染料荧光染色后流式细胞计数死细胞和活细胞,探讨不同抗冻剂对肌腱种子细胞的冻存效果。 (2) 种子细胞冻存后处理的研究:种子细胞给予10%二甲基亚砜+15%小牛血清+75%DMEM冻存两周后解冻分别立即移入人体白蛋白、小牛血清、含血清的DMEM和PBS等四种溶液处理后分别荧光标记后流式细胞计数,探讨种子细胞解冻后何种处理好。 (3) 细胞浓度影响的研究:将种子细胞在不同浓度条件下保存2周后
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