BvCPD的生物信息学及功能分析

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BvCPD编码细胞色素P450类固醇侧链羟化酶(CYP90),调控油菜素甾醇(BRs)的生物合成。为探索BvCPD基因在甜菜生长发育中的功能,本研究对其家族成员进行了生物信息学和甜菜生育期的表达分析,构建Bv2_qyup基因的RNAi干扰载体并将其与过表达载体分别遗传转化拟南芥,初步鉴定其功能。主要研究结果如下:1、共检测到76个BvCPD家族成员,聚为10个亚组,其中,第Ⅱ亚组的BvCPD家族成员最多(16个);BvCPD染色体定位发现,在甜菜9条染色体上均有分布,其中分布最多的是第7条染色体,但仍有10个家族成员尚未明确定位;BvCPD蛋白共有10个保守性模体,模体2和模体7存在于所有BvCPD家族成员中。2、进一步对BvCPD家族成员中的Bv2_qyup蛋白进行分析发现,Bv2_qyup蛋白编码473个氨基酸,相对分子量为54.11 kDa,等电点为8.85,其编码的蛋白二级结构以α-螺旋和无规则卷曲为主,定位于细胞质中,是一种含信号肽的亲水跨膜蛋白,存在44个磷酸化位点;同源多重比对发现,Bv2_qyup蛋白与藜麦、菠菜、毛果杨、黄瓜和拟南芥CPD的同源性较高。3、Bv2_qyup基因在甜菜不同基因型、不同发育时期和不同器官中的表达量均有显著差异,在丰产型甜菜品种中,苗期及叶丛快速生长期的Bv2_qyup基因表达量在叶片中显著高于叶柄和根,在块根及糖分增长期该基因的表达量在根中急剧升高。不同基因型甜菜该基因表达量在块根及糖分增长期表达量达到峰值,且丰产型品种显著高于高糖型品种。4、通过遗传转化拟南芥,获得Bv2_qyup基因的过表达和RNAi转基因株系。T2代转Bv2_qyup基因过表达植株中Bv2_qyup基因的表达量升高,内源BR含量升高。并对T2代转基因株系进行表型分析:株高、果荚长度、果荚重量和单荚结种子粒数、根体积和地上部鲜重等在过表达株系中均显著高于野生型,野生型显著高于沉默株系。叶长、叶面积、根长和根重在过表达株系中均显著高于沉默株系。
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