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目的:从整体水平和细胞水平分别探讨奈比洛尔改善2型糖尿病大鼠主动脉内皮功能障碍（ED）的作用及其可能机制,为糖尿病大血管并发症的治疗提供新思路。方法:动物实验:实验选取12周龄2型糖尿病雄性大鼠（Zucker Diabetic Fatty,ZDF）和Lean Zucker雄性大鼠（LZR）,分为:ZDF模型组（n=7,ig,等量蒸馏水）;ZDF+奈比洛尔组（n=7,ig,10mg/kg/day）;ZDF+阿替洛尔组（n=7,ig,100mg/kg/day）;ZDF+卡托普利组（n=7,ig,40mg/kg/day）;LZR对照组（n=7,ig,等量蒸馏水）。实验期间每周检测各组大鼠体重并依据体重变化给药。0月,6月对各组大鼠进行血糖监测和糖耐量实验,6月末测量各组大鼠颈动脉收缩压（SBP）,舒张压（DBP）并计算平均动脉压（MAP）,检测血浆胰岛素,血浆NO。快速分离胸主动脉:（1）用于离体血管环实验;（2）石蜡包埋做石蜡切片,用于组织学染色（HE染色,Masson染色）观察大鼠主动脉结构;（3）OCT包埋后液氮速冻,做冰冻切片,用于免疫荧光实验（vWF免疫荧光观察大鼠主动脉内皮细胞损伤情况,α-SMA观察主动脉平滑肌细胞增殖情况）和活性氧（ROS）检测;（4）液氮速冻后-80℃保存,用于制备组织匀浆检测主动脉NO和western blot实验(eNOS,eNOS uncouple,p-eNOS,NOX4,p22phox,AMPK和p-AMPK,Akt和p-Akt的蛋白表达)。细胞实验:（一）奈比洛尔改善高糖（HG）急性诱导人主动脉内皮细胞（HAEC）ED的作用。实验设置空白对照组,渗透压对照组,高糖组（30mmol/L）,不同浓度奈比洛尔（0.01,0.1,1,10μmol/L）组。免疫荧光法测vWF表达,荧光探针法检测细胞内活性氧ROS,一氧化氮荧光探针试剂盒检测细胞内NO,一氧化氮合酶试剂盒检测NOS,MTT检测奈比洛尔对HAEC细胞活力及对HG诱导损伤HAEC后细胞活力的影响。（二）奈比洛尔通过AMPK-PKC-NOX-ROS通路抑制高糖诱导HAEC ED。分别利用DPI（1μmol/L,NOX抑制剂）,AICAR（1mmol/L,AMPK激动剂）,Go 6983（5μmol/L,PKC抑制剂）,Compound C（10μmol/L,AMPK抑制剂）和PMA（10nmol/L,PKC激动剂）,观察对奈比洛尔（1μmol/L）改善高糖诱导HAEC ED作用的影响。免疫荧光法测vWF,p47phox,Rac-1转膜情况。荧光探针法检测细胞内活性氧ROS,Western Blot检测细胞NOX4,p22phox,p47phox,Rac-1,PKC,AMPK,p-AMPK蛋白表达。（三）奈比洛尔通过AMPK-Akt-eNOS通路抑制高糖诱导HAEC ED。分别利用AICAR（1mmol/L,AMPK激动剂）,Compound C（10μmol/L,AMPK抑制剂）,L-NAME（100μmol/L,NOS抑制剂）和Uprosertib（10μmol/L,AKT抑制剂）,观察对奈比洛尔（1μmol/L）改善高糖诱导HAEC ED作用的影响。免疫荧光法测vWF,一氧化氮荧光探针试剂盒检测细胞内NO,一氧化氮合酶试剂盒检测NOS,Western Blot检测Akt,p-Akt,eNOS,p-eNOS,eNOS uncouple蛋白表达。结果:动物实验结果:与LZR组比较,ZDF大鼠体重降低,空腹血糖升高,糖耐量受损,血浆胰岛素分泌减少,血压升高,血浆和主动脉NO减少。奈比洛尔,卡托普利和阿替洛尔均可出现显著的降压作用。奈比洛尔和卡托普利不影响ZDF大鼠血糖水平,增加血浆和主动脉NO,而阿替洛尔增加ZDF大鼠血糖水平,对NO无显著影响。HE染色和Masson染色实验结果示ZDF大鼠主动脉结构与LZR组比较无显著性差异,荧光染色结果显示vWF表达减弱,α-SMA表达无显著性差异。离体血管反应性实验中,ZDF大鼠主动脉对苯肾上腺素（PE）的缩血管反应增加,对乙酰胆碱（ACh）诱导的内皮依赖性舒血管反应降低,但对硝普钠（SNP）诱导的非内皮依赖性舒血管反应无显著性改变。奈比洛尔和卡托普利可增加ZDF大鼠主动脉vWF表达和对ACh的舒张反应,且奈比洛尔还降低ZDF主动脉对PE的收缩反应。进一步研究发现,奈比洛尔还可减轻ZDF大鼠主动脉ROS,这可能与其增强胸主动脉AMP活化蛋白激酶（AMPK）磷酸化,减弱NADPH氧化酶（NOX4）及其活性单位p22phox的表达有关。另外奈比洛尔还可通过调节ZDF大鼠主动脉eNOS表达（增强主动脉eNOS,p-eNOS,Akt和p-Akt表达,抑制eNOS失藕联）增加主动脉NO含量。卡托普利对ZDF大鼠主动脉ROS和NO也有改善,而阿替洛尔对上述指标几乎无影响。细胞实验结果:（一）与空白组和渗透压对照组相比,高糖（30 mmol/L,48h）致HAEC vWF表达减少,ROS水平增加,NO生成减少,NOS活性降低。而奈比洛尔（1μmol/L,10μmol/L）可改善高糖诱导的上述HAEC损伤。奈比洛尔对HAEC的存活率无显著影响,且（1μmol/L,10μmol/L）可有效改善HG诱导的HAEC存活率降低。（二）与高糖组相比,奈比洛尔（1μmol/L）和DPI（1μmol/L,NOX抑制剂）均可改善高糖诱导HAEC ED:增加vWF表达,降低ROS水平,抑制p47phox,Rac-1的转膜,增强AMPK和p-AMPK的表达和p-AMPK/AMPK,减少NOX4,p22phox,PKC,p47phox,Rac-1表达。进一步,奈比洛尔与AICAR（1mmol/L,AMPK激动剂）均可降低高糖损伤后HAEC NOX4,p22phox和PKC的蛋白表达,Compound C（10μmol/L,AMPK抑制剂）可抑制奈比洛尔的上述作用。奈比洛尔和Go 6983（5μmol/L,PKC抑制剂）可降低高糖损伤后HAEC NOX4和p22phox的蛋白表达,PMA（10nmol/L,PKC激动剂）可减弱奈比洛尔的上述作用。（三）与高糖组相比,奈比洛尔增加高糖损伤后HAEC vWF荧光强度,NO含量和NOS活性,增加Akt,p-Akt,eNOS,p-eNOS的蛋白表达,抑制eNOS失藕联。Uprosertib（10μmol/L,Akt抑制剂）可抑制奈比洛尔的上述作用,而L-NAME（100μmol/L,NOS抑制剂）可以减弱除了Akt和p-Akt之外奈比洛尔的上述作用。进一步,奈比洛尔与AICAR（AMPK激动剂）增加Akt,p-Akt,eNOS,p-eNOS的蛋白表达,抑制eNOS失藕联。Compound C（10μmol/L,AMPK抑制剂）可抑制奈比洛尔的上述作用。结论:奈比洛尔通过调节AMPK-PKC-NOX-ROS和AMPK-Akt-eNOS两条通路改善2型糖尿病大鼠主动脉内皮功能障碍。