凡纳滨对虾(Litopenaeusvannamei),又称白肢虾(white-legshrimp)、白对虾(whiteshrimp)。属节肢动物门(Arthropoda)、甲壳纲(Crustacea)、十足目(Decapoda)、游泳亚目(Natantia)、对虾科(Penaeidae)、对虾属(Penaeus)、Lito-penaeus亚属,原产于美洲温暖海域,是世界三大养殖对虾中单产最高的对虾品种,已成为我国对虾的主导养殖品种和重要出口水产品之一。但是,随着对虾规模化、集约化养殖程度提高,引发了养殖环境恶化、种质退化、非传染性疾病和传染性疾病滋生等一系列问题,特别是传染性疾病,主要包括细菌性、真菌性和病毒性疾病等,给对虾养殖业造成了巨大损失。滥用化学药品导致细菌产生抗药性,抑制对虾自身免疫力,影响人类身体健康。因此,迫切需要寻求一条解决对虾安全生产行之有效的新途径。针对对虾免疫系统开展深入研究是合理有效防治各类病害的根本和依据,探索对虾免疫防御特点及疾病预防策略已成为近年来水产养殖学热点。本论文以凡纳滨对虾为研究对象,通过84天长期养殖试验,研究β-1,3-葡聚糖对凡纳滨对虾生长性能、生理功能和免疫力的影响;采取阶段取样方法,分析血液生理生化指标、免疫和抗氧化指标及相关因子基因表达的动态变化规律;通过亚硝酸盐应激试验,探讨β-1,3-葡聚糖对亚硝酸盐应激凡纳滨对虾的生理功能和免疫力的影响。本论文主要包括如下五个部分:　　 1.长期摄食β-1.3-葡聚糖对凡纳滨对虾生长性能、生理功能和免疫力的影响　　 (1)饲料中长期添加一定剂量β-1,3-葡聚糖显著提高凡纳滨对虾增重率、特定生长率和肝胰腺消化酶活性。随着饲料中β-1,3-葡聚糖添加量的增加,凡纳滨对虾的末重、增重率、特定生长率均呈现出先上升后下降的趋势,均在250mg/kg组达到最高,显著高于对照组和1000mg/kg(间隔添加)组(P＜0.05)。凡纳滨对虾的存活率随饲料中β-1,3-葡聚糖添加量增加呈上升趋势,最高值出现在1000mg/kgβ-1,3-葡聚糖组,但各试验组之间无显著性差异(P＞0.05)。凡纳滨对虾肝胰腺蛋白酶和脂肪酶在500mg/kg组达到最高,淀粉酶在250和500mg/kg组达到最高。各试验组凡纳滨对虾全虾水分、粗蛋白、租脂肪、灰分和肌肉胆固醇、甘油三酯含量没有显著差异。　　 (2)饲料中长期添加一定剂量β-1,3-葡聚糖显著提高凡纳滨对虾血清中谷丙转氨酸、乳酸盐、胆固醇、甘油三酯水平和肝胰腺糖原含量。250mg/kgβ-1,3-葡聚糖组对虾血清谷丙转氨酶、乳酸盐、胆固醇、甘油三酯和肝脏糖原水平显著高于对照组(P＜0.05)。血清总蛋白和葡萄糖水平、肌肉糖原含量在各试验组之间无显著差异(P＞0.05)。　　 (3)饲料中长期添加β-1,3-葡聚糖显著提高凡纳滨对虾血清过氧化氢酶、溶菌酶、酚氧化物酶、碱性磷酸酶活性和肝胰腺超氧化物歧化酶、溶菌酶、超氧阴离子以及肌肉过氧化氢酶、溶菌酶活性。1000mg/kgβ-1,3-葡聚糖组对虾血清过氧化氢酶、溶菌酶水平显著高于对照组(P＜0.05),500和1000mg/kgβ-1,3-葡聚糖组对虾血清酚氧化物酶水平显著高于对照组(P＜0.05),500mg/kgβ-1,3-葡聚糖组对虾血清碱性磷酸酶和肌肉过氧化氢酶、溶菌酶水平显著高于对照组。250和500mg/kgβ-1,3-葡聚糖组对虾肝胰腺超氧化物歧化酶水平显著高于对照组,1000(间隔)mg/kgβ-1,3-葡聚糖组对虾肝胰腺溶菌酶水平显著高于对照组,250mg/kgβ-1,3-葡聚糖组对虾肝胰腺抗氧阴离子含量显著高于对照组(P＜0.05)。　　 (4)饲料中长期添加一定剂量β-1,3-葡聚糖显著提高凡纳滨对虾肌肉脂多糖/β-1,3-葡聚糖结合蛋白基因表达水平。500mg/kgβ-1,3-葡聚糖组对虾肌肉脂多糖/β-1,3-葡聚糖结合蛋白基因表达水平显著高于对照组。　　 2.β-1.3-葡聚糖对凡纳滨对虾生理生化指标变化规律的影响　　 (1)凡纳滨对虾血液生化指标随摄食β-1,3-葡聚糖的时间和剂量呈现不同的变化趋势。血清胆固醇、甘油三酯和葡萄糖随摄食β-1,3-葡聚糖时间延长呈现出先下降后上升再下降的趋势,其最高值出现在摄食后的第42天。血清乳酸盐随β-1,3-葡聚糖摄食时间延长呈现出下降的趋势,最高值出现在摄食后的第14天。血清总蛋白随摄食不同剂量β-1,3-葡聚糖时间呈现出先上升后下降或持续上升的趋势,其最高值分别出现在摄食后的第42和84天。　　 (2)饲料中添加一定剂量β-1,3-葡聚糖显著提高凡纳滨对虾血清胆固醇、甘油三酯、葡萄糖、乳酸盐和总蛋白水平。从对血清胆固醇、甘油三酯、葡萄糖和乳酸盐的促进作用和维持时间比较分析,摄食较低剂量β-1,3-葡聚糖(250mg/kg)增强效果最显著:从对血清总蛋白的促进作用和维持时间比较分析,摄食较高剂量β-1,3-葡聚糖(500mg/kg)促进效果最显著。　　 3.β-1,3-葡聚糖对凡纳滨对虾非特异性免疫和抗氧化指标变化规律的影响　　 (1)凡纳滨对虾肝胰腺和肌肉非特异性免疫指标随β-1,3-葡聚糖摄食时间呈现不同的变化趋势。凡纳滨对虾肝胰腺超氧化物歧化酶和肌肉过氧化氢酶水平,随摄食葡聚糖时间的延长呈现双驼峰形,其最高值出现在摄食后的第28和56天。肝胰腺过氧化氢酶、抗氧化能力和肌肉溶菌酶水平,随摄食葡聚糖时间的延长呈现先上升后下降的趋势,其最高值出现在摄食后的第14天。肌肉超氧化物歧化酶和超氧阴离子水平,随摄食葡聚糖时间延长呈现上升再下降的趋势,其最高值出现在摄食后的第56天。凡纳滨对虾肝胰腺溶菌酶的最高值分别出现在摄食后的第14和56天,肝胰腺抗超氧阴离子的最高值分别出现在摄食后的第28和42天。　　 (2)凡纳滨对虾肝胰腺和肌肉非特异性免疫指标随摄食β-1,3-葡聚糖的剂量呈现不同的变化趋势。从对肝胰腺和肌肉超氧化物歧化酶及肝胰腺溶菌酶、抗氧阴离子、总抗氧化能力的促进作用和维持时间比较分析,长期添加250或1000(间隔)mg/kgβ-1,3-葡聚糖效果较为显著;从对肝胰腺和肌肉中过氧化氢酶及肌肉溶菌酶、抗氧阴离子的促进作用和维持时间比较分析,长期添加500mg/kgβ-1,3-葡聚糖效果较为显著。　　 4.β-1,3-葡聚糖对凡纳滨对虾免疫相关基因表达变化规律的影响　　 (1)凡纳滨对虾肌肉免疫因子的基因表达水平随摄食β-1,3-葡聚糖的时间呈现双峰形变化趋势,在14或28天时短暂而迅速上升,在56天时呈现延迟的上调反应。血蓝蛋白、超氧化物歧化酶和脂多糖/β-1,3-葡聚糖结合蛋白在第14天迅速上调,丝氨酸蛋白酶和Penaedin-3在28和56天快速达到最大值。相反,酚氧化物酶原基因表达显示延迟上调反应,直到56天才开始缓慢上升。　　 (2)凡纳滨对虾肌肉免疫因子的基因表达水平随摄食β-1,3-葡聚糖的剂量呈现不同的变化趋势。超氧化物歧化酶基因表达在250和500mg/kgβ-1,3-葡聚糖组达到最高,Penaedin-3和酚氧化物酶原基因表达在500mg/kgβ-1,3-葡聚糖组达到最高,肌肉血蓝蛋白、脂多糖/β-1,3-葡聚糖结合蛋白和丝氨酸蛋白酶基因表达在500或1000mg/kgβ-1,3-葡聚糖组达到最高。从对肌肉血蓝蛋白、脂多糖/β-1,3-葡聚糖结合蛋白、Penaedin-3、酚氧化物酶原(proPO)、丝氨酸蛋白酶(SP)、超氧化物歧化酶基因表达水平的促进作用和维持时间比较分析,500mg/kg组的增强效果最显著。　　 5.β-1,3-葡聚糖对凡纳滨对虾抗亚硝酸氮应激能力的影响　　 6.结论　　 (1)在84天的养殖试验中,饲料中添加较低剂量(250mg/kg)的β-1,3-葡聚糖通过增强肝胰腺淀粉酶活性和促进血清胆固醇、甘油三酯、葡萄糖和乳酸盐代谢,显著提高凡纳滨对虾的生长性能;添加较高剂量(500mg/kg)能够通过增强肝胰腺蛋白酶、脂肪酶和淀粉酶活性和提高免疫、抗氧化相关因子及基因表达,显著增强凡纳滨对虾免疫力和抗氧化功能。　　 (2)在84天的动态试验中,血清胆固醇、甘油三酯和葡萄糖随摄食β-1,3-葡聚糖时间延长呈现出先下降后上升再下降的趋势,其最高值出现在摄食后的第42天;乳酸盐呈下降趋势,最高值出现在摄食后14天。从对血清胆固醇、甘油三酯、葡萄糖和乳酸盐的促进作用和维持时间比较分析,摄食250mg/kgβ-1,3-葡聚糖的增强效果最显著。血清总蛋白随摄食不同剂量β-1,3-葡聚糖时间呈现出先上升后下降或持续上升的趋势,其最高值分别出现在摄食后的第42和84天;从对血清总蛋白的促进作用和维持时间比较分析,摄食500mg/kgβ-1,3-葡聚糖促进效果最显著。　　 (3)在84天的动态试验中,从对肝胰腺和肌肉超氧化物歧化酶、过氧化氢酶、溶菌酶、抗氧阴离子、总抗氧化能力以及肌肉血蓝蛋白、脂多糖/β-1,3-葡聚糖结合蛋白、Penaedin-3、酚氧化物酶原、丝氨酸蛋白酶(SP)、超氧化物歧化酶基因表达水平的促进作用和维持时间比较分析,摄食500mg/kgβ-1,3-葡聚糖效果较为显著,在14或28天时短暂而迅速上升,56时呈现延迟的上调反应。　　 (4)在亚硝酸盐应激试验中,较高剂量β-1,3-葡聚糖(500mg/kg)通过促进能量代谢、提高免疫和抗氧化功能及上调相关基因的表达,显著提高了对虾的存活率,增强对虾抗亚硝酸氮应激能力。