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为了研究稀土元素促进长春花悬浮培养细胞次生代谢产物的作用机理,以Ce4+作为诱导子,建立了1mMCe4+诱导长春花细胞悬浮培养体系,研究了1mMCe4+诱导作用下长春花细胞的活性氧、MAPK途径、PAL、次生代谢产物以及胞内金属离子的变化,试图从信号转导角度探索Ce4+诱导植物细胞次生代谢产物合成的基本规律。
在研究Ce4+诱导作用下长春花细胞体系中H2O2的变化及其作用中发现Ce4+诱导长春花细胞出现了H2O2进发现象;H2O2清除剂CAT的加入降低了Ce4+诱导的长春花细胞PAL的活化和长春质碱的合成;研究表明Ce4+诱导H2O2的产生先于长春质碱合成的激活,由此看出Ce4+诱导H2O2的产生处于Ce4+诱导长春质碱合成的上游。外加H2O2也能诱导细胞PAL的激活和长春质碱的合成,证明H202是Ce4+诱导长春花细胞次生代谢所必需的。研究还发现只是低浓度的Ce4+(0.5mM~1mM)促进长春花细胞H2O2的产生和长春质碱的合成。
应用JNK、ERK和p38等途径特异性抑制剂的实验表明:JNK、ERK和p38等MAPK途径参与了Ce4+诱导长春花细胞体系次生代谢产物合成的过程,而只有。ERK和p38途径参与了Ce4+诱导长春花细胞H2O2进发的过程,但在H2O2进发的下游JNK、ERK和p38等多条MAPK途径参与了将H2O2信号分子的传递调控次生代谢产物的合成。
应用光谱学方法研究了不同浓度Ce4+对离体的过氧化氢酶(CAT)活力和构象的影响,发现0.01mM Ce4+在提高CAT活力的同时使其α-螺旋含量增加,β-折叠含量减小,而0.05 mM~0.2 mM Ce4+对CAT活性和二级结构的作用则相反。
运用电感耦合等离子发射光谱仪对1mMCe4+诱导作用下的长春花细胞胞内的Ca2+、Mg2+、Zn2+等金属离子进行了测定,分析了在不同的诱导时间金属离子含量的变化和吲哚生物总碱合成之间的关系。研究发现lmMCe4+促进长春花细胞次生代谢产物合成的同时引起了细胞外Ca2+的内流和细胞内K+的外渗。