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近年来,动物性食品中的兽药残留问题引起了国内外的普遍关注。目前的免疫分析方法多数只能检测一种或一类具有相似结构的药物。为了提高检测效率、节省检测时间、降低检测成本,发展能够同时检测两种或两类兽药残留的免疫分析方法对于保障动物性食品安全具有较为重要意义。本文开展了同时检测两种喹噁啉类药物残留标示物以及同时检测磺胺类、喹诺酮类两类药物残留的免疫分析方法研究。以4-(3-甲基-喹嗯啉-2-甲酰胺基)丁酸为半抗原制备了单克隆抗体,该单抗对3-甲基-喹噁啉-2-酸(MQCA)和喹噁啉-2-羧酸(QCA)等5种喹嗯啉类药物双脱氧代谢物的交叉反应率在50%-2400%之间,其中MQCA和QCA的IC50值分别为4.8和9.6ng/mL。本文利用该抗体建立了检测动物组织(鱼肉、虾肉、猪肉和鸡肉)中MQCA和QCA残留的ELISA方法。该方法检测动物组织中MQCA和QCA残留的检测限(LOD)为1.54μg/kg,当MQCA和QCA在动物组织中添加浓度分别为2-20μg/kg时,该方法的添加回收率在76%-108%之间,变异系数在4.2%-13.3%之间,符合兽药残留检测的相关要求。为了提高免疫分析方法的灵敏度,本文建立了检测MQCA和QCA残留生物素亲和素信号放大酶联免疫分析(BA-ELISA)和化学发光免疫分析(CLIA)。BA-ELISA方法对MQCA和QCA的IC50值为1.6和3.6ng/ml;检测动物组织的LOD值为1.04μg/kg;MQCA在动物组织中的添加浓度在2-8μg/kg时,添加回收率在72%-106%,变异系数在6.7%-12.6%之间。CLIA方法对MQCA和QCA的IC50值为0.42和1.05ng,mL;检测动物组织的LOD值为0.76μg/kg;MQCA在动物组织中的添加浓度为1-4μg/kg时,添加回收率在71%-108%之间；变异系数在7.0%-14.4%之间。上述两种方法的灵敏度和检测限等符合兽药残留检测的相关要求。以辣根过氧化物酶HRP标记羊抗兔二抗来识别磺胺类药物(SAs)的多克隆抗体,以碱性磷酸酶ALP标记羊抗鼠二抗来识别喹诺酮药物(QNs)单克隆抗体,从而实现在同一个反应体系中同时检测牛奶中22种SAs和13种QNs残留的双显色酶联免疫吸附试验(DC-ELISA)。该DC-ELISA方法对SAs和QNs的检测限分别为5.8和2.4μg/L。当SAs和QNs在牛奶中的添加浓度分别为10-100μg/L时,SAs的添加回收率均在67%-101%之间,变异系数在8.1%-16.4%之间；QNs的添加回收率在72%-105%之间,变异系数在4.8%-9.3%之间,该方法满足SAs和QNs两类兽药残留检测的相关要求。以琼脂糖凝胶作为载体,建立了同时检测牛奶中14种SAs和13种QNs的凝胶穿流免疫亲和层析试验(FTIACT)方法,并评价了HRP、荧光微球、量子点、脂质体包裹量子点(LQDs)四种标记物的试验效果。以LQDs做标记物的FTIACT肉眼判断检测牛奶中SAs和QNs残留的Cut off值分别为1和0.5μg/L。通过光密度值分析,LQDs-FTIACT定量分析方法的LODs为0.27μg/L(SAs)和0.12μg/L(QNs),在空白牛奶样品中SM2添加浓度为0.25、0.15μg/L和CIP的添加浓度为0.1、0.25μg/L时,平均添加回收率在89%-114%之间,变异系数在9.2%-12.3%之间,满足兽药残留检测的相关要求。