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环糊精和温敏聚合物聚(N-异丙基丙烯酰胺)(PNIPA)对蛋白质的复性均有良好的促进作用,那么经PNIPA改性后的环糊精衍生物能否更有效促进变性蛋白质的复性呢?为此,我们将氨基-β-环糊精(EDA-β-CD)和带末端羧基的聚 N-异丙基丙烯酰胺(PNIPA-COOH)偶联得到了一种温敏β-环糊精衍生物(β-CD-PNIPA),分别考察其在不同变性体系、不同β-CD-PNIPA浓度、不同复性温度以及在表面活性剂十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)存在下对溶菌酶的复性效果;通过与EDA-β-CD和PNIPA-COOH的对比分析,揭示了β-CD-PNIPA分子中的环糊精空腔与 PNIPA链段的协同作用,并使用荧光光谱法进行了验证。实验结果表明:β-CD-PNIPA对盐酸胍变性溶菌酶的复性具有抑制作用,但对尿素变性溶菌酶的复性具有促进作用;在常温下,0.4mg/mL的β-CD-PNIPA可使1 mg/mL溶菌酶的复性率增加至83.7%,而直接稀释法仅为55.8%;β-CD-PNIPA对溶菌酶的复性温度应略小于β-CD-PNIPA的相转变温度(LCST,33.6℃),高于这一温度时会由于β-CD-PNIPA发生相变而导致溶菌酶的复性率急剧降低;将β-CD-PNIPA在CTAB辅助溶菌酶复性一段时间(如12h)后再加入到复性体系,溶菌酶的复性效果更佳。在辅助溶菌酶复性的过程中,β-CD-PNIPA分子中的环糊精空腔与PNIPA链段可以同时促进溶菌酶的复性,荧光光谱实验结果证实了这一结论。
针对天然乳胶(NRL)制品蛋白质过敏及乳胶制品的生物降解问题,考察了海藻酸钠、透明质酸及羧甲基纤维素的氧化产物氧化海藻酸钠(OSA)、氧化透明质酸(OHA)和氧化羧甲基纤维素(OCMC)对天然胶乳中的蛋白质的固定作用,对比了这三种氧化多糖对乳胶蛋白质的固定效果,分析了加入氧化多糖后蛋白质在乳胶膜中的分布情况,讨论了氧化多糖含量以及氧化多糖分子中的醛基含量对乳胶膜的力学性能、热降解及生物降解过程的影响。实验结果显示,三种氧化多糖对天然乳胶中蛋白质都具有很好的固定作用;以OSA为研究对象表明,乳胶膜中OSA含量越多,乳胶膜中水溶性蛋白质(WSP)析出率越低,当OSA占干乳胶的1.67wt%时,乳胶膜WSP的溶出率即趋近于0;OSA中醛基含量越多,WSP溶出率越低,当OSA醛基含量为4.8mmo1/时,仅用0.33 wt%(以固含量计)的OSA即可使乳胶膜中WSP出率低于50μg/g。未加OSA的乳胶膜在土埋25天后的质量损失率为5 wt%左右,之后质量不再发生明显改变;而含有OSA的乳胶膜在土埋25天后质量继续下降,其质量损失率超过乳胶中非橡胶成份所占的百分率,且OSA用量越大,乳胶膜的质量损失率越大。同时,氧化多糖对乳胶膜的力学性能无明显的影响。