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目的:对猪苓进行液体发酵研究,确定猪苓液体发酵的最适发酵培养基和最适培养条件;从发酵液中提取和分离猪苓多糖,并对猪苓胞外多糖进行纯化、体外抗氧化活性研究。方法:(1)应用PDA培养基进行试管斜面培养,对7株来源不同的猪苓菌株进行活化、复壮;(2)观察记录不同试管斜面培养基菌龄对发酵适应期和对数生长期的影响;测定发酵液的pH值、还原糖含量和菌丝体量,并绘制猪苓液体发酵生长曲线;(3)对温度、转速、接种量、装液量、碳源种类、氮源种类、碳源浓度、氮源浓度分别进行单因素分析,对常量元素和微量元素分别进行L423和L934正交试验分析,优化猪苓液体发酵培养基和培养条件;(4)对猪苓菌丝体超声提取条件进行优化;采用水提醇沉方法分别对猪苓菌丝体多糖和子实体多糖提取率进行比较;采用水提醇沉方法分别提取胞外水溶性多糖、胞内水溶性多糖和胞内碱溶性多糖;并用苯酚-硫酸法测定多糖含量;(5)进行多糖基本理化性质的检验,并通过芬顿(Fenton)反应、邻苯三酚自氧化法、抑制H2O2诱导红细胞氧化溶血、抑制肝组织脂质过氧化等方法,测定猪苓多糖体外抗氧化活性。结果:(1)7株猪苓菌种都活化、复壮良好;其中10号菌株成活率高、生长迅速,确定为下阶段试验菌株。(2)确定了25日龄为最适固体斜面培养基菌龄,并绘制出了猪苓液体发酵生长曲线。(3)单因素试验结果表明,猪苓发酵的最适培养条件为:温度26℃、转速130r/min、接种量10%、装液量100mL/250mL;碳源为马铃薯淀粉,浓度4.0%,氮源酵母浸出汁,浓度2%;正交试验结果表明,常量元素MgSO4.7H2O 1.0g、KH2PO4 2.0g、CaCl2 0.1g;微量元素ZnSO4 1.5mg、MnSO4 1.5mg、FeSO4 0.5mg、Vb1 2.0mg。(4)猪苓菌丝体最佳超声提取条件为超声频率16kHz、液固比为20、破碎时间为30min;猪苓菌丝体多糖和子实体多糖提取率分别为3.9%、1.7%;猪苓胞外水溶性多糖、胞内水溶性多糖、胞内碱溶性多糖提取率分别为6.3mg/mL、0.8mg/mL、1.7mg/mL。(5)基本理化性质鉴定表明,所提猪苓多糖具有糖的基本性质。体外抗氧化试验表明,猪苓胞外多糖具有较好的抗氧化作用。在多糖浓度为8.0mg/mL时,其对羟自由基清除率达60.3%;在多糖浓度为6.0mg/mL时,其超氧阴离子自由基清除率为49.8%;当多糖浓度为3.0mg/mL时,对H2O2诱导的小鼠红细胞氧化溶血的抑制率可达35.5%;当浓度为4.0mg/mL时,对脂质过氧化抑制率达到56.8%。结论:优化了猪苓液体发酵的最适发酵培养基和最适培养条件;提取出猪苓胞外多糖,并具有一定的体外抗氧化功能。