DY芽孢杆菌固态发酵羊胃容物产木聚糖酶的研究

来源 :内蒙古农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:wilsai
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本文以DY芽孢杆菌固态发酵羊胃容物为研究对象,通过对单因素及正交实验DY芽孢杆菌固态发酵羊胃容物产木聚糖酶的培养条件的优化、在最优发酵条件下所产木聚糖粗酶液进行提取、分离、纯化及该酶的相关酶学性质研究,其研究结果如下:1.通过羊胃容物添加量、营养基料比(玉米粉:麸皮)、固液比、接种量、初始pH、无机盐等单因素对固态发酵羊胃容物产木聚糖酶活力的影响,以及正交实验对发酵条件的优化,其最优发酵条件为:每20g固态发酵培养基中,羊胃容物10g(50%)、营养基料10g(50%,玉米粉:麸皮=2:1)、固液比1:4、接种量6ml(3~5×107cfu/ml)、初始pH7.0、K+5g/L、Na+4g/L、Mn2+0.3g/L、35℃下发酵48h,其酶活力达到95.03IU/ml。2.通过对DY芽孢杆菌固态发酵羊胃容物在最优发酵条件下所产木聚糖粗酶液进行提取、分离、纯化。先用硫酸铵盐析法经20%~60%逐级分级分离、将沉淀蛋白回溶后再通过Sephadex G-25脱盐、Sephadex G-75凝胶层析的依次分离纯化,通过酶活测定、蛋白质含量测定、SDS-PAGE和底物-PAGE电泳等一系列生物化学方法,分离、纯化出一种木聚糖酶,其分子量约为13.7KDa。该分离纯化的回收率为12.59%,比活力为194.36IU/mg,纯化倍数4.17。3.将DY芽孢杆菌固态发酵所产的木聚糖酶进行其酶学性质研究,测得该酶最适温度为65℃,最适pH为7.0;Km为5.272g/L,Vmax为0.207μmol/min;该酶具有较高的热稳定性,在中性及弱碱性环境中也有较强的稳定性;不同的金属离子对木聚糖酶的活性影响不同,在5~10mmol/L范围内,Ca2+、Cu2+、对酶有强烈抑制作用,Fe2+、Fe3+对酶有激活作用,其中10mmol/L Fe3+的激活作用最大。K+、Na+、Mg2+、Zn2+、Mn2+、Ba2+对该木聚糖酶活性影响较小。
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