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目的:研究衣康酸二甲酯(Dimethyl itaconate,DI)在烟曲霉菌(Aspergillus fumigatus,A.fumigatus)感染角膜炎中发挥的保护作用及其具体的作用机制。方法:1、烟曲霉菌感染C57BL/6小鼠角膜,给予小鼠角膜2m M DI或PBS处理,观察小鼠角膜感染后临床评分;菌落计数法检测感染小鼠角膜中真菌负荷;采用免疫荧光法、MPO法及流式细胞术检测PBS处理感染角膜、DI处理感染角膜中中性粒细胞数量的变化;采用PCR法和Western blot法检测各组小鼠角膜中IL-1β、CXCL1、核因子E2相关因子2(NF-E2-related factor-2,Nrf2)及血红素加氧酶1(Heme oxygenase-1,HO-1)m RNA和蛋白的表达。2、0.25m M DI或PBS预处理人角膜上皮细胞2小时,菌丝刺激细胞8小时或24小时,采用PCR法和ELISA法检测各组细胞中IL-1β、IL-8及IL-6m RNA和蛋白的表达;采用细胞免疫荧光法检测人角膜上皮细胞中Nrf2的表达及定位。3、给予Nrf2抑制剂Brusatol(BT)或HO-1抑制剂Zinc protoporphyrin(Znpp)预处理人角膜上皮细胞2小时,再加入DI刺激细胞2小时,菌丝感染细胞8小时或24小时,采用PCR法和ELISA法检测细胞中IL-1β、IL-8及IL-6 m RNA和蛋白的表达;采用Western blot法检测细胞中HO-1表达。4、分别使用不同浓度的DI(2、5、10、20 m M)与烟曲霉菌共培养48小时,采用吸光度法及荧光染色法检测真菌数量的变化。结果:1、与PBS对照组相比,给予小鼠角膜2m M DI处理后,烟曲霉菌感染3天、5天的小鼠角膜炎症反应显著减轻,临床评分显著降低;感染3天的角膜菌落计数显著降低;感染3天的角膜中中性粒细胞的数量明显减少。2、与PBS对照组相比,给予小鼠角膜2m M DI处理后,感染3天的角膜中IL-1β及CXCL1 m RNA和蛋白的表达显著下降。3、0.25 m M DI预处理烟曲霉菌刺激的人角膜上皮细胞,可以显著降低细胞中IL-1β、IL-8及IL-6 m RNA和蛋白的表达。4、给予感染小鼠角膜2m M DI处理,可以显著增加角膜中Nrf2及HO-1的m RNA和蛋白的表达;给予感染人角膜上皮细胞0.25 m M DI预处理,可以显著增加细胞中Nrf2的表达,且Nrf2表达主要集中于细胞核内。5、与单纯使用0.25 m M DI处理人角膜上皮细胞相比,在DI处理前给予人角膜上皮细胞15 n M BT预处理,可以显著减少感染的角膜上皮细胞中HO-1的m RNA和蛋白的表达;与单纯使用0.25 m M DI处理人角膜上皮细胞相比,给予人角膜上皮细胞15 n M BT或10μM Znpp预处理,再给予0.25m M DI处理,角膜上皮细胞中IL-1β、IL-8及IL-6 m RNA和蛋白的表达增加,差异有统计学意义。6、与对照组相比,2 m M,5 m M,10 m M或20 m M DI与烟曲霉菌共培养48小时后,可以显著减少烟曲霉菌的数量及生物膜的形成。结论:DI可以通过激活Nrf2/HO-1信号通路减轻真菌感染的小鼠角膜及人角膜上皮细胞中的炎症水平。此外,DI可以抑制烟曲霉菌的生长。提示DI可能在真菌性角膜炎中发挥保护作用。