论文部分内容阅读
目的:通过比较舒正颗粒治疗前后2型糖尿病患者(符合痰瘀内阻证)的中医证候,初步探讨舒正颗粒治疗痰瘀内阻型2型糖尿病的辨证要点,并从与糖尿病发病机制密切相关的PI3K/AKT信号通路入手,初步探讨舒正颗粒治疗2型糖尿病的分子机制。方法:1.采用前瞻性单盲随机对照研究方法,纳入痰瘀内阻型2型糖尿病患者72例,随机分为对照组和舒正颗粒治疗组,对照组给予降糖、调脂、降压等糖尿病常规治疗,治疗组在常规治疗同时给予舒正颗粒口服。12周为一疗程。详细收集两组患者性别、年龄、糖尿病病程,合并病等基本资料,治疗前后FPG、HbA1c、中医单项证候积分等,进行两组间比较及舒正颗粒组自身前后比较,初步探寻舒正颗粒治疗痰瘀内阻型2型糖尿病的辨证要点。2.70只雌性SD大鼠,随机取10只为正常对照组,余60只(考虑到造模期间大鼠死亡或造模不成功)空腹单次腹腔注射STZ 30mg/kg,血糖≥16.7mmol/L为造模成功,以脂肪乳灌胃6周。6周后将成模的50只大鼠随机分为5组,即模型组、二甲双胍组、舒正颗粒高、中、低剂量组,每组10只,二甲双胍组给予二甲双胍180mg/100g﹒d,舒正颗粒高、中、低剂量组分别给予舒正颗粒540mg、270mg、135mg/100g﹒d,正常组与模型组给予等容积蒸馏水,并始终以脂肪乳灌胃。治疗4周后,采血测定大鼠空腹血糖(FPG)、糖化血红蛋白(HbA1c)、空腹胰岛素(FINS),取大鼠肝脏组织,采用蛋白免疫印迹法(western-blot法)检测肝脏中PI3K/AKT通路主要信号分子胰岛素受体底物2(Insulin Receptor Substrate,IRS-2)、磷脂酰肌醇-3激酶(phosphoinositide3-kinase,PI3K)、蛋白激酶B(proteinkinase B,AKT2)、糖原合酶激酶-3β(Glycogen synthase kinase-3β,GSK3β)、转录因子叉头蛋白1(Forkhead transcription factor-1,FOXO1)、磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(Phosphoenolpyruvate carboxykinase,PEPCK)、葡萄糖-6-磷酸酶(glucose-6-Phosphatase,G6P)、葡萄糖转运体-4(Glucose Transporter-4,GLUT4)、肿瘤抑制因子(phosphatase and tensin homolog deleted on chromosome ten,PTEN)的蛋白含量,实时荧光定量法(RT-PCR法)检测肝脏中IRS2、PI3K、AKT2、GSK3β、FOXO1、PEPCK、G6P、GLUT4、PTEN mRNA相对表达量。结果:1.临床观察:舒正颗粒能显著降低2型糖尿病患者FPG、HbA1c,与对照组比较均有统计学差异(P<0.01或0.05),与治疗前比较均有显著差异(P<0.01)。舒正颗粒能显著改善2型糖尿病患者中医证候,总有效率为88.89%,与对照组比较有统计学差异(P<0.05)。舒正颗粒治疗后中医证候积分较治疗前及对照组均显著下降(P<0.01)。舒正颗粒组患者治疗前与治疗后口渴多饮、口淡、口黏痰多、恶心欲吐、头身困重、头晕、倦怠乏力、气短懒言、面色晦暗、心烦急躁、视物模糊、肢体麻木、下肢疼痛、胸闷、胸痛、尿黄的临床证候频数比较有显著差异(P<0.01),口渴不欲饮、口苦口干、脘腹胀、耳鸣、形体肥胖、腹泻(P<0.05)。易饥多食、头痛、失眠、心悸、怕热多汗、浮肿、便秘、尿频尿多、舌淡黯有齿痕、苔腻的临床证候频数无显著差异(P>0.05)。与治疗前比较,舒正颗粒治疗后患者口淡、口黏痰多、口苦口干、脘腹胀、恶心欲吐、头身困重、头晕、倦怠乏力、气短懒言、面色晦暗、心烦急躁、失眠、视物模糊、肢体麻木、下肢疼痛、胸闷、胸痛、舌淡黯有齿痕、苔腻证候积分中位数有显著差异(P<0.01)。口渴多饮、口渴不欲饮、饮食减少、尿黄证候积分中位数有显著差异(P<0.05)。易饥多食、头痛、心悸、耳鸣、怕热多汗、浮肿、形体肥胖、腹泻、便秘、尿频尿多证候积分中位数无显著差异(P>0.05)。2.动物实验:与模型组相比,舒正颗粒高、中、低剂量组及二甲双胍组,大鼠FPG、HbA1c、FINS均显著降低(P<0.05)。与二甲双胍组相比,舒正高剂量组均无差异(P>0.05)。与模型组相比,舒正颗粒高剂量组IRS-2、PI3K、AKT2的蛋白含量及mRNA相对表达水平均升高,具有统计学差异(P<0.01或P<0.05),GSK3β、FOXO1、PEPCK、G6P、PTEN的蛋白含量及mRNA相对表达水平均下降,具有统计学差异(P<0.01或P<0.05)。舒正颗粒中、低剂量组AKT2 mRNA表达升高,GSK3β、FOXO1、PEPCK mRNA相对表达水平下降,具有统计学差异(P<0.01或P<0.05);IRS-2、PI3K mRNA相对表达水平升高,G6P、PTEN mRNA相对表达水平下降,但差异不显著(P>0.05)。舒正颗粒中剂量组IRS2、AKT2的蛋白含量升高,PEPCK、G6P、PTEN蛋白含量降低,具有统计学差异(P<0.01或P<0.05),PI3K蛋白含量升高,GSK3β、FOXO1蛋白含量降低,但差异不显著(P>0.05);舒正颗粒低剂量组AKT2蛋白含量升高,PEPCK、G6P、PTEN蛋白含量降低,具有统计学差异(P<0.01或P<0.05),PI3K、IRS2蛋白含量升高,GSK3β、FOXO1蛋白含量降低,但差异不显著(P>0.05)。舒正颗粒高、中、低剂量组GLUT4蛋白含量及mRNA表达均上升,但均无统计学差异(P>0.05)。结论:1.舒正颗粒能显著降低2型糖尿病患者FPG、HbA1c水平,改善患者糖尿病相关证候,其中对口淡、口黏痰多、恶心欲吐、头身困重、头晕、倦怠乏力、气短懒言、面色晦暗、心烦急躁、视物模糊、肢体麻木、下肢疼痛、胸闷、胸痛证候改善效果最佳。临床运用舒正颗粒治疗糖尿病过程中,可将上述14大证候作为舒正颗粒使用的辨证要点。2.舒正颗粒能显著降低STZ造模+高脂喂养的糖尿病大鼠FPG、HbA1c、FINS,提高大鼠肝脏PI3K/AKT信号通路的活性,并可能通过以下途径实现:(1)提高IRS/PI3K/AKT活性,抑制GSK3β,进而提高糖原合成酶活性,促进糖原合成,降低血糖。(2)提高PI3K/AKT活性,抑制FOXO1,进而降低糖异生基因G6P和PEPCK活性,减少糖异生。(3)下调PI3K/AKT的负性调节因子PTEN的表达,进而减轻其对PI3K/AKT信号通路的抑制,使该通路增强胰岛素敏感性,减轻胰岛素抵抗等作用得以正常发挥。