东北林蛙是东北地区两栖动物的优势物种之一,也是名贵的经济蛙种。东北林蛙易患病,对养殖业来说,林蛙疾病的预防和治疗是养殖能否成功获利的关键因素。东北林蛙的皮肤上寄居着大量细菌,这些细菌与林蛙的健康息息相关,本实验采用高通量测序技术检测了野生和养殖东北林蛙皮肤的菌群结构,旨在全面了解东北林蛙皮肤细菌的种类和丰度及不同环境中东北林蛙皮肤菌群结构和潜在致病菌属的差异;由于东北林蛙患病后注射和饲喂的给药方式较难实现,所以考虑林蛙皮肤的特殊结构和功能,用药浴方式使药物透皮吸收。本实验通过对东北林蛙进行药浴,探索药物药浴后东北林蛙皮肤的菌群结构和潜在致病菌属的变化,进而了解药浴对菌群结构及潜在致病菌属的影响。实验进行了野生与养殖东北林蛙皮肤菌群结构检测及对比分析(野生组n=7,养殖组n=7);抗生素(庆大霉素)、益生菌(枯草芽孢杆菌)和中药(大黄粉水煎液)药浴对养殖东北林蛙皮肤菌群结构的影响分析(对照组n=7,抗生素组n=14,益生菌组n=7,中药组n=7)。分别取野生和养殖东北林蛙的皮肤样本和不同药物药浴后的皮肤样本,测序分析后得到样本菌群的物种组成和丰度信息。通过Alpha多样性分析、Beta多样性分析和潜在致病菌属比对等步骤,考察和比较各组的菌群多样性和结构及潜在致病菌属的差异。实验结果:(1)野生与养殖东北林蛙皮肤菌群的Alpha多样性和Beta多样性差异显著。养殖组主要优势菌门为厚壁菌门、变形杆菌门和放线菌门;野生组为变形杆菌门、拟杆菌门和厚壁菌门。分析得到7个潜在致病菌属,养殖组中的柠檬酸杆菌属、变形菌属和葡萄球菌属显著高于野生组;野生组中假单胞菌属显著高于养殖组;气单胞菌属、金黄杆菌属和链球菌属在两组中差异不显著。(2)抗生素药浴对菌群Alpha多样性影响不显著,对Beta多样性影响显著。药浴后优势菌门为变形杆菌门、拟杆菌门、放线菌门等;优势菌属为节杆菌属、伊丽莎白菌属、假单胞菌属等。抗生素药浴对潜在致病菌属气单胞菌属和金黄杆菌属有显著抑制作用。(3)益生菌药浴对菌群Alpha多样性影响不显著,对Beta多样性影响显著。药浴后优势菌门为变形杆菌门、拟杆菌门、放线菌门等;优势菌属为伊丽莎白菌属、金黄杆菌属、节杆菌属等。益生菌药浴对气单胞菌属有显著抑制作用。(4)中药药浴对菌群Alpha多样性影响不显著,对Beta多样性影响显著。药浴后优势菌门为拟杆菌门、变形杆菌门、放线菌门等;优势菌属为伊丽莎白菌属、节杆菌属、黄杆菌属等。中药药浴对气单胞菌属有显著抑制作用。(5)对抗生素、益生菌和中药三种药浴处理进行综合比较分析,ANOSIM分析结果表明抗生素组与对照组、中药组、益生菌组均有显著差异,益生菌组与对照组有显著差异,益生菌组与中药组无显著差异,中药组与对照组有显著差异。综上实验得出结论:养殖与野生东北林蛙皮肤菌群差异显著。养殖组中优势菌门为厚壁菌门、变形杆菌门、放线菌门、绿屈挠菌门、梭杆菌门、拟杆菌门和蓝细菌门;野生组的优势菌门为变形杆菌门、拟杆菌门、厚壁菌门和放线菌门。庆大霉素,枯草芽孢杆菌和大黄粉水煎液药浴对东北林蛙皮肤菌群Beta多样性影响显著,对几种潜在致病菌属有抑制作用。本研究为东北林蛙物种的研究保护提供基础资料,为养殖中药物的选择提供理论依据。