HPV16分离株系统发生分析及各重组抗原制备与鉴定

来源 :哈尔滨医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:lushengli2009
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目的:研究东北地区HPV分离株基因组特点与系统发生特征;制备HPV16型各重组抗原,为全谱血清学研究做前期准备。 方法:采集东北地区来源的宫颈癌患者手术标本,采用PCR方法获取各基因开放读码框(ORFs),建立克隆质粒库并进行序列测定。对比3株不同标本来源的病毒株基因组的核苷酸变化特点,与其他地域的HPV16基因组对比并进行系统发生分析。再次采用PCR方法扩增HPV16 E2、E4、E5、E6和E7读码框构建重组表达质粒,建立原核表达菌株,诱导表达带有His<,6>标签的重组蛋白。对重组蛋白进行SDS-PAGE和Western blot鉴定。利用Ni<2+>金属螯合层析纯化各目的蛋白。分别免疫BalB/C小鼠后检测小鼠血清抗体滴度、CD<,4>/CD<,8>比例、mIFN-γ水平测定免疫小鼠的免疫功能,以分析制备抗原的免疫活性。 结果:通过序列对比分析,发现东北地区检出的3株病毒株与其他地区病毒株相比有自身特征,有一株病毒分离株发现有特殊序列出现。SDS-PAGE和Western blot证实了表达蛋白的特异性。免疫结果表明部分蛋白可以刺激动物体内产生特异性免疫反应。 结论:东北地区HPV16基因组具有独特性,与欧洲分离株在进化距离上较接近。3株在核苷酸变化上有共同特点。实验中制备的重组抗原具有良好的免疫原性和免疫反应性,可作为下一步HPV16免疫学研究的检测抗原。
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