口腔颌面部恶性肿瘤的发病率居全身恶性肿瘤的第六位,而其中至少有80%是鳞状细胞癌。口腔鳞状细胞癌恶性程度较高,且易发生淋巴结转移,预后较差,术后常继发畸形,对患者的生活质量造成极大的影响。舌鳞状细胞癌(oral tongue squamous cell carcinoma OTSCC)是口腔癌中最常见的恶性肿瘤,约占口腔鳞癌的40%以上,其发病率、致死率位于口腔肿瘤的首位。近年来舌鳞状细胞癌的发病率呈明显上升趋势,有发病低龄化的倾向。在过去的20年里,虽然传统的治疗方法如手术、放疗、化疗等都有一定程度的发展,但是口腔癌的预后仍然不能达到让人满意的效果；目前其5年生存率也只有50%-60%左右,并且大约1／3的患者会复发；另外,经过手术治疗的患者吞咽、语言功能及面部容貌等受到较大影响,严重影响生活质量。因此,人们对新的治疗方法如基因治疗、免疫治疗、靶向肿瘤干细胞治疗等生物治疗手段的关注越来越多。这些技术通常是通过特异性地作用于肿瘤细胞生长因子受体、信号传导通路中特定的酶位点及肿瘤细胞增殖、分裂、侵袭及转移过程中相关基因等的特定靶点,特异性地杀死肿瘤细胞,但同时又极少损伤正常的人体细胞,能大大地降低对人体的毒性反应。FHL2(Four and a half LIM domains2)是LIM蛋白家族LIM-only亚类中的成员,LIM蛋白被定义为有一个或多个LIM结构域、可以调节蛋白与蛋白间的相互作用的蛋白质。FHL2蛋白由279个氨基酸组成,包括4.5个LIM结构域；最初是在心肌细胞发现,主要参与心肌细胞的分化及细胞生长调控。近期研究表明FHL2在多种组织的细胞分化及癌症发生方面发挥重要作用,发挥转录共调节因子的功能,是雄激素受体(androgen receptor, AR)、cAMP响应元件结合蛋白(cAMP responsive element binding protein, CREB)、激活蛋白1(activator protein1, AP-1)及胰岛素样生长因子结合蛋白(insulin-like growth factor binding protein5, IGFBP-5)等多种转录因子的共调节因子,在器官分化、发育、细胞凋亡、染色质重建及肿瘤的发生发展过程中均发挥重要的调控作用。目前认为,FHL2在多种肿瘤(包括前列腺癌,肝癌、卵巢上皮细胞癌等)的发生发展演化过程以及在肿瘤细胞的分化过程中起重要的作用,并且其作用具有组织依赖性,在一些肿瘤如卵巢癌、乳腺癌、前列腺癌及胃癌中表达上调,起转录共激活因子的作用,促进肿瘤的发生发展,而在另一些组织如肝癌中表达下调,发挥转录共抑制因子的作用,抑制肿瘤的发生发展。FHL2作用广泛,且在不同癌组织中发挥不同的作用,而它与舌鳞状细胞癌的关系目前尚未见国内外相关研究报道。本课题拟通过体内及体外研究,利用免疫组化、流式细胞术、Real-time PCR及Western blot等技术,检测FHL2在舌鳞状细胞癌中的表达及分布情况,初步探讨FHL2在舌鳞状细胞癌中可能发挥的作用；稳定转染FHL2真核表达载体,增强FHL2在舌鳞状细胞癌细胞系中的表达,并将FHL2过表达细胞系接种于裸鼠皮下,观察对舌鳞状细胞癌生物学行为的影响,分析FHL2与舌鳞状细胞癌的相关性及其作用机制,以期为临床提供新的治疗思路与方法。根据实验设计,本课题共包括三部分：第一部分FHL2在不同分化水平舌鳞状细胞癌组织中的表达及分布研究在病理科收集舌鳞状细胞癌病理切片,利用免疫组化的方法观察并检测FHL2在肿瘤组织中的表达与分布情况,对比不同分化水平舌鳞癌细胞及癌旁组织之间FHL2表达的差异。初步探讨FHL2在舌鳞状细胞癌发生发展过程中可能发挥的作用。第二部分FHL2过表达对舌鳞状细胞癌细胞系Tca8113生物学行为的影响利用基因转染技术增强FHL2在舌鳞状细胞癌细胞系Tca8113中的表达,采用MTT、Transwell、Real-time PCR、Western blot及流式细胞术等实验技术,观察FHL2对舌鳞状细胞癌细胞的生物学行为,包括细胞增殖、细胞凋亡、细胞周期、侵袭迁移情况及可能的相关信号分子表达的影响,探讨FHL2在舌鳞状细胞癌细胞中发挥的作用及其可能的信号路径机制。本部分有三个实验组成：1.FHL2稳定转染舌鳞状细胞癌细胞系的建立。利用脂质体介导的方法将pcDNA3.0-FHL2基因转入舌鳞状细胞癌细胞系Tca8113中,建立稳定转染FHL2过表达的舌鳞状细胞癌细胞系模型pcDNA3.0-FHL2-Tca8113,同时建立空载体舌鳞状细胞癌细胞系模型pcDNA3.0-Tca8113.2.FHL2过表达对舌鳞状细胞癌生物学行为的影响。利用MTT、流式细胞术、Transwell小室细胞侵袭实验及细胞划痕等实验手段检测三组细胞(舌鳞状细胞癌细胞系Tca8113、FHL2过表达舌鳞状细胞癌细胞系pcDNA3.0-FHL2-Tca8113及空载体舌鳞状细胞癌细胞系pcDNA3.0-Tca8113)之间细胞增殖、细胞周期及细胞凋亡等生物学特性的差异,分析FHL2过表达对舌鳞状细胞癌细胞生物学行为的影响。3.FHL2在舌鳞状细胞癌发生发展中作用机制的初步研究。利用Real-time PCR及Western blot等技术检测三种细胞系Tca8113、pcDNA3.0-FHL2-Tca8113及pcDNA3.0-Tca8113中舌鳞状细胞癌相关基因NF-KB、β-catenin等的表达情况,初步探讨FHL2调控舌鳞状细胞癌发生发展过程中的分子机制。第三部分舌鳞状细胞癌细胞系Tca8113中FHL2过表达对裸鼠成瘤的影响将三种细胞系Tca8113、pcDNA3.0-FHL2-Tca8113及pcDNA3.0-Tca8113植入裸鼠皮下,选取3天、6天、9天、12天、15天、18天、21天、24天、27天及30天,观察肿瘤的生长趋势,对比三组之间的差别,分析FHL2过表达对舌鳞状细胞癌发生发展的影响。结论1. FHL2在舌鳞状细胞癌组织中表达上调,且分化程度越低表达越强。2. FHL2过表达可提高舌鳞状细胞癌细胞的侵袭能力和迁移能力。3. FHL2的过表达可使舌鳞状细胞癌细胞在G0／G1期的细胞比例减少,但同时也加快了它的凋亡。4. FHL2过表达可使舌鳞状细胞癌细胞增殖能力提高,使肿瘤生长加速。5. FHL2的过表达使舌鳞状细胞癌细胞中NF-KB、β-catenin的表达上调。