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研究目的异基因造血干细胞移植(allogeneic stem cell transplantation,allo-HSCT)后患者免疫功能是影响患者预后的重要因素,免疫重建的速度、各组分间的平衡关系,尤其Th1、Th2、Th17、Treg等T淋巴细胞亚群,对移植后急性移植物抗宿主病(graft-versus-host disease,GVHD)、移植后感染并发症的发生、发展以及恶性肿瘤的复发与否尤为重要,是免疫重建中人们关注的重点。既往关于免疫重建的研究多关注免疫细胞和免疫相关因子在外周血中的变化,而对骨髓中免疫组分的变化关注不多。骨髓作为重要的免疫器官,其中多种免疫细胞及其分泌的细胞因子和介导的信号通路组成“免疫微环境”。各亚群的分化、增殖有相互抑制、相互促进的复杂关系,以维持机体免疫功能的动态平衡。因此,本课题旨在研究异基因造血干细胞移植后骨髓免疫微环境重建规律及其与GVHD的关系,并与外周血免疫重建情况进行比较分析。研究方法选择51例因恶性血液病在本院行allo-HSCT患者及7例健康供者为研究对象,取骨髓血及外周血,用流式细胞术进行淋巴细胞亚群检测(CD4~+T细胞、CD8~+T细胞、Th1细胞、Th2细胞、Th17细胞、Treg细胞),移植患者分别在移植前、移植后+15天、+30天、+60天、+90天、+180天进行标本采集。结果1、Allo-HSCT后骨髓中T亚群变化:+180天内各观察点,CD4~+T细胞占淋巴细胞比例显著低于对照组((6.7±1.5)%～(10.1±1.6)%),导致CD4~+/CD8~+细胞比值倒置并显著低于对照组((0.299±0.07)～(0.796±0.128))。Th1细胞比例在移植后+15天达最高水平((9.0±0.6)%),且在+180天内均明显高于对照组((4.4±0.4)%～(9.0±0.6)%);Th2细胞比例与对照组相似,导致Th1/Th2细胞比值在移植后+15天升至最高水平,且在移植后+90天内均显著高于对照组(2.215±0.225～3.928±0.299),移植后+180天降至正常水平。Th17细胞比例在移植后+180天内均显著高于对照组((2.5±0.2)%～(6.2±0.7)%),Treg细胞比例在移植前至移植后各节点较对照组无显著差异,导致Th17/Treg细胞比值在移植后迅速上升,且在+90天内均显著高于对照组(2.147±0.264～2.518±0.343),在移植后+180天降至正常水平。2、Allo-HSCT后外周血中T亚群变化:移植后+180天内,外周血CD4~+T细胞比例((11.8±1.7)%～(13.5±2.3)%)显著低于对照组,CD8~+T细胞比例(13.1±2.5)%～(42.7±3.1)%)显著高于对照组,这导致CD4~+/CD8~+细胞比值显著降低(0.342±0.06～0.441±0.083)。另,Th1细胞比例显著升高((3.5±0.3)%～(7.2±0.5)),而Th2细胞比例无显著变化,导致Th1/Th2细胞比值移植后显著升高(1.960±0.153～3.816±0.267),但可在移植后+180天恢复正常。由于Th17细胞比例显著升高,但Treg细胞比例无显著变化,Th17/Treg细胞比值移植后早期显著升高,+90天恢复正常。3、Allo-HSCT后骨髓与外周血免疫重建差异:移植后各时间节点,骨髓与外周血CD4~+T细胞比例、CD8~+T细胞比例、CD4~+/CD8~+细胞比值、Th1/Th2细胞比值、Th17/Treg细胞比值的变化趋势基本一致。但骨髓中CD4~+T细胞比例、CD8~+T细胞比例显著低于外周血中水平。CD4~+T细胞的亚群中:在移植后+15天,骨髓中Th1细胞比例、Th17细胞比例、Treg细胞比例均显著高于外周血。4、Allo-HSCT后患者按中位年龄36岁分组:两组骨髓中CD4~+T细胞比例、CD8~+T细胞比例、Th1细胞比例、Th2细胞比例、Th17细胞比例、Th1/Th2细胞比值在移植前至移植后各节点无显著差异。移植后+90天,≥36岁组骨髓中Treg细胞比例显著低于<36岁组,导致Th17/Treg细胞比值均显著高于<36岁组。两组骨髓中CD4~+T细胞比例、CD8~+T细胞比例均显著高于外周血中水平。5、Allo-HSCT后患者按HLA(human leukocyte antigen,HLA)配型分组:两组骨髓中Treg细胞比例、Th1/Th2细胞比值在各节点无显著差异;移植后早期,HLA不合组骨髓中CD4~+T细胞比例显著低于HLA相合组水平,CD8~+T细胞比例显著高于HLA相合组水平,导致HLA不合组骨髓中CD4~+/CD8~+细胞比值(0.265±0.062)显著低于HLA相合组(0.939±0.142)。移植后+60天,HLA不合组骨髓中Th1细胞比例(8.1±1.1)%明显高于HLA相合组(5.5±0.5)%;HLA不合组骨髓中Th17细胞比例(5.4±0.6)%显著高于HLA相合组(3.6±0.3)%。6、Allo-HSCT后患者按预处理中是否应予ATG分组:移植后早期,ATG组骨髓中CD4~+T细胞比例显著低于ATG组水平;CD8~+T细胞比例显著高于无ATG组,导致ATG组骨髓中CD4~+/CD8~+细胞比值均显著低于无ATG组。ATG组骨髓中Th1细胞比例、Th2细胞比例、Th17细胞比例、Treg细胞比例显著高于无ATG组水平。7、Allo-HSCT后患者按人类巨细胞病毒(cytomegalovirus,CMV)感染分组:两组骨髓中CD4+细胞比例、Th2细胞比例、Th17细胞比例、Treg细胞比例、CD4~+/CD8~+细胞比值、Th1/Th2细胞比值、Th17/Treg细胞比值在各节点差异并无统计学意义;移植后+30天,CMV+组骨髓中CD8~+T细胞比例(63.1±8.4)%明显高于CMV-组(46.6±3.7)%水平;移植后+15天,CMV+组骨髓中Th1细胞比例(11.9±1.2)%明显高于CMV-组(8.2±0.7)%。8、按是否发生a GVHD(acute graft-versus-host disease,a GVHD)将所有患者分组:两组骨髓中CD4~+T细胞比例、CD8~+T细胞比例、Th2细胞比例、Th1/Th2细比值在移植前及移植后各节点无显著差异;在移植后早期,a GVHD组骨髓中Th1细胞比例、Th17细胞比例、Treg细胞比例、Th17/Treg细胞比值显著高于无a GVHD组;a GVHD组CD4~+/CD8~+细胞比值显著低于无a GVHD组。结论1、异基因造血干细胞移植后,骨髓和外周血中均有CD4~+T细胞比例显著下降,而CD8~+T细胞、Th1细胞、Th17细胞的比例显著增高,导致CD4~+/CD8~+细胞比值、Th1/Th2细胞比值、Th17/Treg细胞比值显著升高。2、异基因造血干细胞移植后,骨髓中CD4~+T细胞、CD8~+T细胞占淋巴细胞比例显著低于外周血中水平;移植后早期,Th1、Th17、Treg细胞比例均显著高于外周血,但变化规律与外周血大致相似;骨髓中Th17/Treg细胞比值恢复较外周血延迟。3、异基因造血干细胞移植后,T细胞亚群及其相互之间的比值变化与年龄、HLA相合程度、ATG的应用、有无CMV感染及a GVHD有一定的关系。且骨髓与外周血间有一定差异。本研究为进一步研究造血干细胞移植后骨髓免疫微环境的重建规律及其与移植后早期并发症的相互关系提供了重要的基础数据。