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自2016年5月以来,安徽、江苏、山东、云南、四川等养鹅场爆发一种以痛风为主要病症的传染病,该病表现为腿关节腔充满白色浆液及肾脏尿酸盐沉积导致肾炎,5-19日龄雏鹅易感,死亡率高达30%,给养鹅业及相关产业带来严重经济损失。本研究首先对实验室对2016-2019年从各地采集的RT-PCR鹅星状病毒(Goose Astroviruses,GoAstV)阳性临床发病鹅样品,进行回顾性分析,对其中有时间和地区代表性毒株的ORF1b(编码RNA依赖性RNA聚合酶蛋白),ORF2(编码病毒衣壳蛋白)基因序列比对分析。结果表明,样本LA1605,ZJ1703,ZJ1704,ADY1708,LY1912与中国现已发表的多株鹅星状病毒基因序列同源性高达99.9%。构建GoAstV Cap原核表达载体pET-30a-rCap,转化BL21(DE3)后使用IPTG诱导表达,通过SDS-PAGE和Western blot检测蛋白的表达,大量表达并纯化带有His标签的rCap重组蛋白,获得浓度为0.74 mg/mL的重组蛋白。将纯化的蛋白作为免疫原免疫BALB/c小鼠,采用酶联免疫吸附试验(Enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测免疫小鼠抗体效价,使用经典的细胞杂交瘤技术制备单克隆抗体。通过Western blot与免疫荧光试验(Immunofluorescent assay,IFA)对单克隆抗体进行鉴定。结果表明,通过三次亚克隆最终获得5株分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株1A5G10、1C11B11、5B7G8、9A12B12、9C3E11,抗体效价ELISA检测均可达1:51,200以上;1A5G10、5B7G8、9C3E11重链为IgG1型,1C11B11、9A12B12重链为IgG2b型,轻链均为κ型;制备的单抗均可与重组蛋白反应或GoAstV发生ELISA反应;其中5B7G8株与GoAstV发生Western blot反应,1C11B11、9A12B12株与GoAstV发生Western blot和IFA反应。以病毒衣壳蛋白(Capsid protein,Cap)序列的5’端保守区为模板,设计荧光定量PCR引物和探针。以19T-Cap重组质粒为阳性标准品模板,通过10倍梯度稀释构建标准曲线,建立GoAstV Taq-Man实时荧光定量RT-PCR绝对定量检测方法。标准曲线线性方程为y=-3.4469x+41.528,R~2=0.9948;该方法最低可检测到3.98个拷贝数/μl的病毒,与其他病毒无交叉反应,且变异系数小于2%。通过利用制备的单克隆抗体和建立的荧光定量PCR检测方法,分别对鹅星状病毒的体内外增殖特性展开研究。采用口服、肌肉注射、皮下注射、滴鼻点眼4种不同途径,对6日龄雏鹅进行接种鹅胚增殖的GoAstV-CH16株,于攻毒后1、2、3周对4组雏鹅进行随机剖检,并采取心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、脑、胰脏、腺胃、十二指肠、空肠、回肠、盲肠12个组织。通过使用已建立的方法进行对各个组织样品进行病毒载量的检测。检测结果显示,鹅星状病毒感染雏鹅后1周体内病毒含量达到高峰,以各组织中口服攻毒途径病毒载量最高,其中肾脏病毒载量最高。使用GoAstV-CH16株感染鹅胚原代肾细胞(Goose embryo Kideny Cells,GKC),对GoAstV感染后的GKC细胞进行Western-blot和IFA试验,收集GoAstV感染后不同时间点的细胞培养液,利用已建立的GoAstV Taq-Man荧光定量PCR绝对定量检测方法进行检测,绘制GoAstV感GKC的一步生长曲线。