创伤愈合是由于外伤或其他因素造成皮肤等组织缺损后，局部组织通过再生、重建进行修补恢复的一系列病理生理过程。如何加快伤口愈合一直是创伤领域研究的热点，但难愈创面的治疗一直缺乏有效手段。影响创伤愈合的因素很多，难愈伤口与正常愈合伤口在前炎症介质表达、生长因子浓度以及免疫机制参与等方面的差异文献报道不一，但最终的变化是修复细胞增殖能力下降，创面不能被覆盖，伤口不愈。因此，寻求新的修复细胞促增殖剂，探讨正常创伤愈合的机制，不仅能够丰富细胞生物学行为的理论知识，而且对促进创伤愈合尤其是放创复合伤、大面积创伤、烧伤等难愈伤口有着十分重要的意义。 c-ski是病毒癌基因v-ski的细胞内的同源物，首先发现于禽类动物，可引起鹌鹑胚胎成纤维细胞的快速增殖和肌肉分化。然而，在小鼠胚胎成纤维细胞中c-ski却起着相反的作用，提示了c-ski对成纤维细胞作用的复杂性。皮肤成纤维细胞是重要的修复细胞之一，具有增殖、分泌、分化等多项功能，调控自身及其它修复细胞修复过程。那么，对于外胚层来源的皮肤成纤维细胞，c-ski起着什么样的作用？成纤维细胞有无表达，对成纤维细胞功能有何影响，可能的机理是什么，以及在辐射导致细胞增殖受抑、创伤难愈的病理过程中的作用，目前尚不清楚。本课题制备了大鼠创伤及放创复合伤愈合模型，大体观察了c-ski在创伤愈合及放创复合伤中的表达和规律，及其与细胞增殖、凋亡、Smad3(可能的下游信号)表达的关系，进一步从离体模型探讨了以下四个层面：(1)c-ski对成纤维细胞增殖的影响及机理；(2)c-ski对成纤维细胞胶原分泌和肌成纤维细胞分化的影响；(3)c-ski在TGF-β双向调节成纤维细胞增殖中的作用；(4)辐射对c-ski、Smad3表达，Smad3转录活性的影响及c-ski抗凋亡的活性及机理，得到的主要结果与结论如下：1．辐射导致创伤愈合延迟，在0.5－5.21Gy的范围内，照射剂量越大，愈合时间越长，7Gy和10Gy的照射引起辐射性溃疡(＞40天伤口不愈)。2．创伤后3－9天愈合速度最快，是愈合的关键时期，辐射导致了关键时期愈合速度下降，可能是愈合延迟的原因之一，但是这种损伤是可以修复的，表现为后期愈合速度的加快。<WP=10>3．与愈合速度对应的是，在创面愈合速度最快时(3－9天)，细胞增殖最高，而凋亡率最低，提示二者的平衡对创伤愈合的调节作用。创伤后3天和愈合时凋亡率的增加分别与早期炎症反应消失、晚期肌成纤维细胞凋亡参与伤口重塑有关。辐射导致增殖下降，凋亡率增加，峰值后移，可能是伤口愈合延迟的因素之一。4．c-ski在三种主要修复细胞均有表达，以成纤维细胞最为显著，其表达规律同增殖规律一致，提示c-ski可能参与修复细胞尤其是成纤维细胞增殖、凋亡、胶原分泌、肌成纤维细胞分化等功能的调节；Smad3表达规律同其相反；辐射后c-ski表达下降、峰值后移，可能与愈合延迟有关。 5．c-ski显著促进成纤维细胞增殖，Smad3抑制增殖，而Smad2对增殖影响不大。 c-ski可以逆转Smad3对成纤维细胞增殖的抑制作用，提示c-ski在成纤维细胞内可能也存在着类似上皮细胞内发现的可以抑制Smad3转录活性的作用，从而促进增殖。c-ski表达以G1期表达最为显著，Smad3表达规律同其相反。流式细胞仪发现，c-ski主要通过加快G1期的进展来促进增殖，Western blot检测到G1期调节蛋白CyclinD表达增加，提示增加CyclinD表达也是c-ski促增殖的途径之一。 6．体外转染发现：c-ski可降低Ⅰ型胶原蛋白表达和mRNA转录的水平，但不影响成纤维细胞向肌成纤维细胞的分化。c-ski对分化的影响不能单纯从抑制Smad3和Smad2转录的角度得到解释，提示尚有其他的机制参与。7．TGF-β在＜250pg/ml时促进成纤维细胞增殖，而＞25ng/ml时抑制增殖。细胞增殖活性实验表明，转染c-ski可协同TGF-β对成纤维细胞的小剂量刺激作用，逆转大剂量的抑制作用。8．c-ski表达在TGF-β大剂量抑制时下降，小剂量时增加，而Smad3的表达和核转位均是增加的，只是大剂量时高于小剂量；EMSA显示：大剂量时Smad3转录活性增加，而小剂量时下降。我们推测c-ski在大剂量时表达下降，Smad3发挥其活性，抑制增殖，而小剂量时增加，抑制Smad3活性，刺激增殖。c-ski参与TGF-β对成纤维细胞增殖的双向调节，但其变化的信号途径尚不清楚，推测可能是Smads依赖的。9．在2－8Gy之间，软X线照射以剂量依赖的方式引起成纤维细胞增殖能力下降，凋亡率增加。辐射使c-ski表达下降，Smad3表达增加，并且Smad3转录活性增强，提示c-ski在辐射后细胞增殖受抑、凋亡增加中起着一定的作用。转染c-ski后Bcl-2表达增加、Bax表达不变，从而使Bcl-2/Bax增加，成纤维细胞抗凋亡活性增加。