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【目的】通常我们利用第二次减数分裂中期（MII）的卵母细胞进行去核操作，这种方法去核是盲目的，需要借助DNA染色和荧光紫外线的照射才能完成去核，为了提高延边黄牛体细胞核移植卵母细胞去核效率，我们采用末期（TII期）去核方法进行卵母细胞去核操作，采用末期去核可以避免DNA染色和紫外线的照射，少量细胞质去除等优点。 【方法】卵母细胞体外成熟后去除卵丘颗粒细胞，经7％乙醇处理5-7min，再培养2-3h，待第二极体排出后，进行去核（同时去除第一、二极体及其附近少量的细胞质），来源于延边黄牛耳部和腹部成纤维细胞分别采用带下注核和胞浆内注核方法，进行牛体细胞核移植，MII期卵母细胞作为对照实验。 【结果】激活体外成熟28h的卵母细胞，培养2-3h，第二极体排出率最高，其中35%的卵母细胞中第一、二极体夹角在0-30o之间，通过 Hoechst33342DNA染色观察，有100%的核物质与第一、二极体相邻，而MII期仅为67.4%；末期去核方法，去除第一、二极体及其附近少量细胞质，可达到较高的去核率，采用末期去核方法去除20%细胞质和10%细胞质时去核率显著高于对照组去除30%细胞质的MII期去核方法；末期受体胞质构建的重构胚卵裂率明显高于 MII期对照组，但是囊胚发育率3组之间不显著；来源于牛耳部和腹部成纤维细胞，采用带下注核可以支持囊胚发育，相反采用胞浆内注核没能支持囊胚发育；激活体外成熟（IVM）24h，26h，28h和30h的卵母细胞得到的末期受体胞质所构建的重组胚在卵裂率及囊胚发育率上均没有显著性差异。 【结论】本试验研究表明，激活体外成熟28h的卵母细胞，培养2-3h，第二极体排出率最高，虽然35%的卵母细胞中第一、二极体夹角在0-30o之间，但是100%核物质与第一、二极体相邻；在去除第一、二极体及其附近少量胞质的同时即可达到较高的去核率；末期受体胞质核移植采用带下注核优于胞浆内注核，激活不同IVM时间的卵母细胞所得到的末期胞质对核移植重构胚发育影响差异不显著。