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随着人均寿命的延长和人们生活方式的改变,糖尿病视网膜病变(diabetic retinopathy,DR)的患病率、致盲率正逐年升高,成为人类不可逆性盲的重要原因。因此,DR的防御及治疗成为糖尿病及其并发症研究领域的一个重要课题。近年来研究表明,DR不仅是一种微血管病变更是一种视网膜神经组织损伤的退行性变,视网膜神经细胞凋亡是DR早期最主要的病理表现形式。JNK信号通路作为介导细胞凋亡的一条重要通路在DR的发生发展过程中发挥着重要作用,c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)和半胱氨酸天冬氨酸激酶-3(cysteine aspartic acid specific protease-3,Caspase-3)作为JNK信号通路中的两个重要因子与DR关系密切。中药复方在防治DR方面具有多靶位、多途径的独特优势。菩人丹超微粉(Purendan superfine powder,PRD)是针对糖尿病(diabetes mellitus,DM)病机关键“热、虚、瘀”而设的中药组方,具有益气清热、活血通络之功效[1]。本研究采用自发性2型糖尿病大鼠模型OLETF大鼠为研究对象,探讨PRD对2型糖尿病大鼠模型视网膜病变的保护作用,为PRD治疗DR提供理论基础和研究依据。目的:探讨PRD对糖尿病大鼠视网膜p-JNK和Caspase-3表达的影响。方法:1以自发性雄性2型糖尿病大鼠模型OLETF大鼠和其同系非糖尿病对照鼠LETO雄性大鼠为实验对象,空腹血糖(fasting blood-glucose,FBG)峰值>16.7 mmol/L和负荷后120 min血糖>11.1 mmol/L作为造模成功标准,将24只雄性成模OLETF大鼠按随机数字表法分为DR模型组、PRD治疗组,每组12只,同时选取12只同周龄雄性leto大鼠为空白对照组(正常组)。成功建立模型后,prd治疗组大鼠给予prd(1.8g/kg/d)灌胃2个月。2采用快速血糖仪法监测大鼠血糖,观察大鼠生存状况。3he染色观察视网膜形态结构的变化。4采用脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(tunel)检测大鼠视网膜神经细胞的凋亡情况。5sp免疫组织化学染色法和westernblotting法检测视网膜磷酸化jnk(p-jnk)、caspase-3蛋白的表达。6采用逆转录聚合酶链法(reversereanscription-polymerasechainereaction,rt-pcr)检测大鼠视网膜jnkmrna、caspase-3mrna的表达。结果:1造模前各组大鼠fbg无明显差距,成模时除正常组外,dr模型组、prd治疗组fbg显著升高,差异有统计学意义(p<0.01)。用药后,与dr模型组比较,prd治疗组fbg水平显著降低,有统计学意义(p<0.01)。2各组大鼠视网膜病理学改变:正常组大鼠视网膜组织结构完整、内界膜光滑、分层清晰;节细胞圆形、椭圆形,染色浅,排列整齐;内网状层较厚、疏松;内核层染色稍深,由3~5层细胞构成;外网状层较内网状层明显变薄;外核层染色深,由8~10层细胞组成,排列较紧密;外界膜边界清楚、整齐。dr模型组可见视网膜内界膜明显肿胀、增厚,部分内界膜破裂,内界膜界线不清晰,部分细胞空泡样变、细胞核固缩、溶解。prd治疗组视网膜分层较为清晰,内界膜轻度肿胀,可见少量空泡样变细胞。3各组大鼠视网膜神经细胞的凋亡情况:正常组大鼠视网膜切片未见明显tunel染色阳性细胞;dr模型组及prd治疗组阳性细胞分布范围扩大,tunel染色阳性产物表现为褐色、颗粒状,位于胞核中,主要分布部位为视网膜内核层和神经节细胞(retinalganglioncells,rgcs)层。3组大鼠视网膜中ai的总体比较差异有统计学意义,与正常组相比,dm模型组大鼠视网膜神经细胞ai明显升高(p<0.01);与dm模型组相比,prd治疗组大鼠视网膜神经细胞ai明显降低(p<0.01)。4各组大鼠视网膜p-JNK的表达:免疫组织化学染色结果显示,p-JNK免疫阳性产物为棕黄色、细颗粒状物质,位于胞核和胞质中,阳性细胞主要分布部位为RGCs层及内核层。Western blotting法结果显示,p-JNK蛋白条带位于42 kDa处,β-actin条带位于43 kDa处。RT-PCR结果显示,JNK mRNA条带位于422 bp处,β-actin条带位于425 bp处。糖尿病模型组大鼠与正常组大鼠相比,糖尿病模型组大鼠视网膜组织p-JNK蛋白和mRNA表达明显升高(P<0.01);PRD治疗组大鼠与糖尿病模型组大鼠相比,PRD治疗组大鼠视网膜组织p-JNK蛋白和mRNA表达明显降低(P<0.01)。5大鼠视网膜Caspase-3的表达:免疫组织化学染色结果显示,Caspase-3免疫阳性产物为棕黄色、细颗粒状物质,位于胞核中,阳性细胞主要分布部位为内核层和RGCs层。Western blotting法结果显示,Caspase-3蛋白条带位于34 kDa处,β-actin条带位于43 kDa处。RT-PCR结果显示,Caspase-3 mRNA条带位于329 bp处:β-actin条带位于425 bp处。糖尿病模型组大鼠与正常组大鼠相比,糖尿病模型组大鼠视网膜组织Caspase-3蛋白和mRNA表达明显升高(P<0.01);PRD治疗组大鼠与糖尿病模型组大鼠相比,PRD治疗组大鼠视网膜组织Caspase-3蛋白和mRNA表达明显降低(P<0.01)。结论:PRD可以改善糖尿病视网膜病变中神经组织的损伤,表现为神经细胞凋亡的减少,这可能与下调p-JNK、Caspase-3的表达相关。