目的:乳腺癌是妇女常见的恶性肿瘤,全球流行病学研究表明,在女性恶性肿瘤中,乳腺癌的发病率和死亡率均居首位。肿瘤干细胞假说认为肿瘤干细胞是恶性肿瘤复发及转移的根源。目前越来越多的研究证实CD44⁺CD24^-/low表型的细胞是乳腺癌干细胞相关亚群。内分泌治疗是雌激素受体阳性（estrogen receptor positive,ER⁺）乳腺癌患者不可或缺的治疗手段。本实验探讨雌二醇（estradiol,E₂）、三苯氧胺（tamoxifen,TAM）及晚期乳腺癌化疗常用的药物对雌激素受体阳性的人乳腺癌细胞株MCF-7中CD44⁺CD24^-/low细胞亚群的影响,为临床ER⁺乳腺癌用药提供参考。同时探讨雌激素受体阳性的晚期乳腺癌患者外周血中CD45^-CD44⁺ CD24^-/low细胞亚群与临床治疗的相关性,以预测晚期乳腺癌患者化疗疗效。方法:1体外培养ER⁺人乳腺癌细胞株MCF^-7,选取对数生长期细胞进行试验。实验分对照组、E₂组和E₂⁺TAM组。对照组加入与实验组相同剂量的药物溶剂（无水乙醇）,E₂组分别加入10^-7mol/L,10^-8mol/L,10^-9mol/L的雌激素,E₂⁺TAM组分别在E₂组三个浓度基础上加10^-6mol/L的TAM。培养10天及20天后分别用流式细胞仪检测各组中CD44⁺CD24^-/low细胞亚群的比例。2选取经终浓度10^-8mol/L雌激素的DMEM培养基培养10天的对数生长期细胞MCF-7进行试验。选择晚期乳腺癌化疗常用的药物:多西紫杉醇（DTX）,紫杉醇（ PTX）,阿霉素（EPI）,氟尿嘧啶（5-Fu）为实验用药。应用四甲基偶氮唑蓝（tetrzolium-based colorimetric assay MTT）法分别测定各药物不同浓度的抑制率,选择各药物抑制率为50%（IC50）时的浓度为工作浓度,并以此浓度进行试验。实验分为对照组,24小时组及20天组。对照组加入相同剂量的药物溶剂,24小时组及20天组分别加入工作浓度的药物。24小时组24小时后用流式细胞仪检测各组中CD44⁺CD24^-/low细胞亚群的比例;20天组24小时后终止药物作用,继续培养19天后处理同24小时组。3采集雌激素受体阳性的复发转移性乳腺癌患者化疗第一周期前一天及化疗第三周期前一天的外周静脉血5ml。流式细胞仪检测各标本组中CD45^-CD44⁺CD24^-/low细胞亚群的比例,分析其与临床治疗的相关性,预测化疗疗效。结果:1人乳腺癌细胞株MCF-7中CD44⁺CD24^-/low细胞亚群的比例为:（0.59士0.39）%。不同浓度E₂组培养10天时,MCF-7中CD44⁺CD24^-/low细胞亚群的比例分别为:（8.16士0.31）%,（9.61士0.66）%,（7.10士0.21）%。与对照组相比均升高（P<0.05）。E₂⁺TAM组作用10天后CD44⁺CD24^-/low细胞亚群的比例的分别为:（5.73士0.59）%,（8.12士0.33）%,（6.11士0.44）%。与相应浓度E₂组相比均下降（P<0.05）。不同浓度E₂组培养20天后,MCF-7中CD44⁺ CD24^-/low细胞亚群的比例的分别为:（ 8.46士0.49）%,（9.66士0.50）%,（7.60士0.64）%与对照组相比均升高（P<0.05）。E₂⁺TAM组作用20天后CD44⁺CD24^-/low细胞亚群的比例的分别为:（5.73士0.70）%,（7.73士0.64）%,（5.96士0.49）%与相应浓度E₂组相比CD44⁺CD24^-/low细胞亚群的比例均下降（P<0.05）。2 MTT结果显示:在一定浓度范围内,不同浓度的DTX,PTX,5-Fu,EPI对MCF-7细胞作用24小时后,各药物均呈现剂量-效应依赖关系,其中DTX,5-Fu,EPI呈线性相关,PTX呈对数相关。为确保实验中各药物对MCF-7细胞的处理因素相同,选择各药物IC50的浓度为工作浓度。应用相关分析得出药物浓度与抑制率关系的方程,计算各药物IC50分别为:DTX:3.22ug/mL,PTX:1.89ug/mL,5-Fu:55.46ug/mL,EPI:0.827ug/mL。以10^-8mol/L的E₂作用于MCF-710天及30天后的CD44⁺ CD24^-/low细胞亚群的比例为对照。24小时后各药物组CD44⁺CD24^-/low细胞亚群的比例（ DTX,PTX,5-Fu,EPI）分别为:（12.21士1.10）%,（23.42士2.76）%,（54.25士1.91）%,（41.37士1.57）%与对照组相比均升高（P<0.05）,5-FU使MCF-7中CD44⁺CD24^-/low细胞亚群的比例升高最明显,DTX使MCF-7中CD44⁺CD24^-/low细胞亚群的比例变化最小。20天后CD44⁺CD24^-/low细胞亚群的比例分别为（DTX,PTX,5-Fu,EPI）:（8.68士0.90）%,（8.08士0.82）%,（15.30士1.06）%,（14.39士1.45）%与对照组相比DTX、PTX虽有所降低,但差别无统计学意义（P>0.05）;5-Fu、EPI与对照相比升高（P<0.05）。3健康志愿者外周血中CD45^-CD44⁺CD24^-/low细胞亚群比例为:（1.80士0.10）%,20例患者化疗前的CD45^-CD44⁺CD24^-/low细胞亚群比例为:（6.49士1.77）%,明显高于健康志愿者（P<0.05）。20例患者中疾病稳定（stable disease,SD） 11例,部分缓解（partial response,PR） 7例,疾病进展（progression disease,PD） 2例。PR及SD患者外周血中CD45-CD44⁺CD24^-/low细胞亚群比例化疗后与化疗前相比均有不同程度下降,且差别有统计学意义（P<0.05）。两例PD患者外周血中CD45^-CD44⁺ CD24^-/low细胞亚群比例均升高,但是由于病例数较少无法得出确切结论。结论:1不同浓度雌激素能够使MCF-7中CD44⁺CD24^-/low细胞亚群的比例升高,相同浓度的雌激素作用下添加三苯氧胺能够降低MCF-7中CD44⁺CD24^-/low细胞亚群的比例。2 MCF-7中的CD44⁺CD24^-/low细胞亚群对多西他赛、紫杉醇、氟尿嘧啶及阿霉素均有抵抗能力。多西他赛及紫杉醇对MCF-7中CD44⁺CD24^-/low细胞亚群的比例影响不明显,而氟尿嘧啶及阿霉素能够明显升高CD44⁺CD24^-/low细胞亚群的比例。3雌激素受体阳性的晚期乳腺癌患者外周血中CD45^-CD44⁺CD24^-/low细胞的比例明显高于健康志愿者。化疗有效患者外周血中CD45^-CD44⁺CD24^-/low细胞的比例降低,化疗无效患者外周血中CD45^-CD44⁺CD24^-/low细胞比例的变化与临床相关性有待进一步研究。