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研究背景和目的:根据《2015年中国癌症统计》报道,乳腺癌在中国女性癌症发病率中占首位,约占每年新发癌症的15%;在年龄小于45岁的人群中,乳腺癌是引起女性癌症性死亡的首要原因[1]。乳腺癌是在多种因素的共同作用下发生的,其中,家族史是导致乳腺癌发病的重要因素之一。有研究表明,大约15-20%的乳腺癌患者伴有明显的家族病史[2]。在美国,对于家族背景信息提示可能具有肿瘤的遗传高风险的家族成员,疾病控制与预防中心将建议其进行基因检测,以确定本人的患癌风险。随着基因测序及解读技术的发展,越来越多的基因被证明与乳腺癌的发病相关。其中,BRCA1和BRCA2基因是最早被发现的也是目前被认为与遗传性乳腺癌发病最为密切相关的两个基因[3-5]。有研究报道,在家族性乳腺癌患者中,20-25%为BRCA1或BRCA2基因突变的携带者[6,7]。在乳腺癌患者中,BRCA1/2基因突变携带者具有不同于非携带者的特点。携带BRCA1/2基因突变的乳腺癌患者,对侧乳腺癌的患病风险明显增高:散发性乳腺癌患者10年对侧乳腺癌发生风险为1%,而携带BRCA1/2基因突变的乳腺癌患者10年对侧乳腺癌发生风险高达25%[8]。此外,对于已鉴别出携带BRCA1/2基因突变的正常人群,规律地自检及体检可以有效地监测肿瘤发生,必要时可进行药物预防或手术预防[9]。除了预测发病风险,BRCA1/2基因检测结果还可有助于临床治疗决策的制定。越来越多的对BRCA1/2基因突变患者敏感的药物目前已被发现,这为改善遗传性乳腺癌患者的预后奠定了良好的基础。因此,如何有效地筛选出遗传性乳腺癌患者及遗传性乳腺癌相关基因突变携带者至关重要。而目前,关于中国人群BRCA1/2基因突变情况由于缺乏大规模的样本观测数据尚未形成一致共识,对于如何有效地选择基因检测的目标人群也尚未形成统一的标准。本研究利用NGS技术,对中国人群中遗传高风险乳腺癌患者外周血BRCA1/2基因49个外显子序列进行检测分析,寻找致病性突变位点、SNPs位点,并分别探讨其与乳腺癌临床病理特征之间的关系,旨在能(1)丰富中国人群BRCA1/2基因突变数据库;(2)有助于建立适合中国人群的乳腺癌遗传风险基因检测标准及风险预测模型,从而更好地筛查并防治乳腺癌。研究方法:1.研究对象的收集于2015年5月至2016年5月就诊于第二军医大学附属长海医院,满足入组条件并经病理证实的乳腺癌患者。本研究共收集符合标准的研究对象71例。2.基因检测方法利用NGS技术对患者外周血中BRCA1和BRCA2基因49个外显子序列进行检测及分析,鉴别出有害突变位点及SNP位点。3.临床病理资料收集通过病历记录、病理报告及电话随访确认并收集完整的临床及病理资料。4.统计学处理发病年龄、月经初潮年龄及首次妊娠年龄等计量资料间的比较采用t检验;是否为双侧原发性乳腺癌、有无乳腺癌或卵巢癌家族史及肿瘤临床病理特征指标等计数资料间的比较采用?2检验。检验水准(α)为0.05。统计分析采用统计学软件SPSS 22.0(IBM,Armonk,New York)进行。结果:第一部分BRCA1/2有害突变携带情况及其与乳腺癌临床病理特征关系本研究共检出13例有害突变携带者,有害突变携带率为18.3%。该13例患者中共涵盖有害突变位点11个,6个位于BRCA1基因,5个位于BRCA2基因。其中7个有害突变位点在亚洲人群中尚未见报道。位于BRCA1基因的c.3626T>G和位于BRCA2基因的c.3883C>T为无义突变,导致蛋白翻译的提前终止。乳腺癌临床病理特征与是否携带BRCA1/2基因有害突变存在显著相关性。携带BRCA1/2基因有害突变的患者更倾向于Her2表达阴性(93.3%vs.57.8%,P=0.014),倾向于更高的肿瘤组织学分级(P=0.009)以及有乳腺癌或卵巢癌家族史(66.7%vs.32.8%,P=0.021)。BRCA1基因有害突变携带者倾向于HR表达阴性,BRCA2基因有害突变携带者更倾向于HR表达阳性。第二部分BRCA1/2编码区SNP携带情况及其与乳腺癌临床病理特征关系本研究共检出34个SNP位点,其中14个位于BRCA1基因,20个位于BRCA2基因。在34个SNP位点中,18个为高频突变位点,16个为低频突变位点。在18个高频突变位点中,仅rs799917位点的突变频率小于正常人群携带频率。其中,rs80356892位点多态性与患者临床病理特征存在显著的相关性。该突变在本研究中的检出频率为7.0%,明显高于正常人群携带频率。携带rs80356892位点突变的患者倾向于发生双侧原发性乳腺癌(60.0%vs.7.6%,P=0.004)、有乳腺癌或卵巢癌家族史(100.0%vs.43.7%,P=0.008)以及表现为TNBC(87.5%vs.18.3%,P<0.001)。另外,rs80356892位点突变与肿瘤HR表达为阴性相关。结论:1.目前可鉴别的BRCA1/2基因有害突变仅为遗传性乳腺癌发生的原因之一,另外仍有其他有害突变位点或其他基因的突变可导致乳腺癌的发生。2.由于遗传高风险乳腺癌患者BRCA1/2基因突变风险高于散发性乳腺癌患者及健康人群,因此必要时可建议其进行基因检测,从而采取有针对性的防治措施。3.本研究通过基因检测及分析,丰富了中国人群乃至亚洲人群BRCA1/2基因突变数据库,有助于建立更优的乳腺癌发病风险预测模型及更适合于中国人群的BRCA1/2基因检测标准,从而更好地预防、筛查及治疗遗传性乳腺癌。