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胃癌(Gastric cancer)是目前世界上发病率第五位、死亡率第三位的癌症相关性疾病。胃黏膜肠上皮化生(Gastric intestinal metaplasia)与胃癌的发生发展密切相关,被认为是胃癌重要的癌前病变,为胃癌的预防和治疗提供了一个很宽的时间窗。长期慢性萎缩性胃炎和胆汁酸返流是主要的致病因素。CDX2(Caudal-related homebox 2)是一种尾型同源框基因,能够调节肠道上皮的发生和发育,是一种重要的肠道转录因子。异位CDX2的表达可以诱导肠道表型的发生,能够引起多种组织的肠上皮化生。长期的胆汁酸返流能够诱导CDX2等肠道标志物的升高,与小肠型肠上皮化生的发生有关。Wnt信号通路在许多生理过程中都发挥了重要作用。DKK(Dickkopf)1是Wnt信号通路中重要的抑制因子,参与了多种癌症的发展过程。有研究者认为,在细胞外,DKK1主要通过与配体Wnt竞争受体LRP6从而抑制Wnt信号;还有学者认为,Kremen存在时,DKK1通过诱导形成DKK1-LRP6-Kremen复合物,并能迅速诱导此复合物内吞,从而发挥抑制性作用。DKK家族成员可以作为靶向Wnt信号通路的癌症潜在的治疗靶点,然而DKK1在肠上皮化生中的作用机制尚未有相关研究。本研究进一步探究DKK1在胆汁酸诱导的胃黏膜肠上皮化生中对CDX2的作用及机制。目的探讨DKK1在胆汁酸诱导的胃黏膜肠上皮化生中对CDX2的作用及机制。方法使用脱氧胆酸(DCA)刺激胃黏膜上皮细胞GES-1,用于构建胃黏膜肠上皮化生细胞模型,并验证肠化标志物的表达。使用Wnt通路转录因子芯片筛选胆汁酸处理胃黏膜上皮细胞GES-1前后的转录因子变化情况。使用肠上皮化生组织标本和正常胃黏膜组织标本检测DKK1及CDX2等肠化标志物的表达水平。利用siRNA抑制MKN45细胞DKK1的表达(siDKK1),检测DKK1表达下调对高表达DKK1的MKN45细胞中肠化标志物影响。利用慢病毒上调AGS细胞DKK1的表达(Lv-DKK1),检测DKK1表达上调对低表达DKK1的AGS细胞中肠化标志物影响。使用重亚硫酸盐扩增子测序检测人正常和肠化组织标本及胆汁酸诱导的肠上皮化生细胞细胞模型中DKK1启动子区域的甲基化情况。使用DNA甲基转移酶抑制剂5-aza抑制BGC823,MKN45细胞中DNA甲基化,检测肠化生标志物的变化。结果1.DKK1在脱氧胆酸诱导的肠化生细胞模型和肠化生标本中表达下调。2.CDX2等肠化生标志物在脱氧胆酸刺激的肠化生细胞模型和肠化生组织中表达升高。3.DKK1的敲减和DKK1的上调提示DKK1和肠化生标志物的表达呈负相关。4.与正常胃黏膜组织相比,肠化生标本中DKK1启动子区域甲基化程度高。5.脱氧胆酸(DCA)能够增加DKK1启动子区域部分甲基化。6.在高甲基化胃癌细胞系BGC823,MKN45中,DNA甲基转移酶抑制剂5-aza能够降低肠化生标志物的表达。结论DKK1通过启动子区域的甲基化表达下降,从而上调CDX2等肠化生标志物以参与胆汁酸诱导的胃黏膜肠上皮化生的进展。