论文部分内容阅读
目的:本研究以腹泻型肠易激综合征(IBS-D)模型大鼠为研究对象,观察对比痛泻要方中“抑木”、“培土”组分对IBS-D大鼠内脏敏感性、结肠及海马神经生长因子(NGF)、脑源性神经营养因子(BDNF)表达、肠道菌群结构变化的影响,旨在研究“抑木”白芍防风组分是否通过菌群-肠-脑轴缓解IBS-D内脏高敏感性,为痛泻要方的临床应用及IBS-D的治疗提供新思路。方法:选取40只wistar大鼠,雄性,按体重分层随机分为对照组(Con组)、模型组(Mo组)、陈皮白术组(C-B组)、白芍防风组(B-F组),每组10只。除Con组外的30只大鼠进行造模操作。采用结直肠扩张法与慢性束缚应激联合刺激14天建立IBS-D内脏高敏感大鼠模型,同期Con组大鼠每天仅抓取及抚摸会阴部进行假刺激。造模完成后采用腹部回缩反射(AWR)检测其肠道敏感性,剔除造模不成功的大鼠。对大鼠进行单笼饲养收集粪便检测大便含水量。造模结束后进行干预,各组大鼠以5m L/kg溶液体积进行灌胃,Con组、Mo组给予蒸馏水灌胃,C-B组给予0.405g/ml的陈皮白术浸膏溶液灌胃,B-F组给予0.27g/ml的白芍防风浸膏溶液灌胃,治疗14天。疗程结束后,复测各组大鼠腹部回缩反射评分、大便含水量情况,取结肠组织采用HE染色法观察病理改变,ELISA法检测结肠及海马组织NGF、BDNF蛋白表达情况,采集各组大鼠粪便标本使用16S r DNA技术经过物种聚类信息比对观察肠道菌群结构变化。结果:1.一般情况:造模前各组大鼠精神好、皮毛健康、大便正常;接受造模后的大鼠精神差、懒动、毛发杂乱、大便稀软,食量下降;治疗后,各组治疗大鼠精神状态、毛发健康均好转,食量恢复,大便基本成形,整体精神状态B-F组恢复情况更佳。2.体重增长量:造模后,各组大鼠体重增长较Con组降低(P<0.05);治疗后,与Mo组比较,C-B组、B-F组大鼠体重增长量增加(P<0.05,P<0.05),B-F组与C-B组体重增长无明显差异(P>0.05)。3.腹泻情况(大便含水量):造模后,与Con组比较,各组大鼠大便含水量明显增加(P<0.05);治疗后,与Mo组比较,C-B组、B-F组大鼠大便含水量明显降低(P<0.05,P<0.05),B-F组与C-B组大便含水量无明显差异(P>0.05)。4.内脏敏感性评价:造模后,与Con组比较,各组大鼠内脏疼痛阈值均显著下降(P<0.05);治疗后,与Mo组比较,C-B组疼痛阈值升高,但差异不明显(P>0.05),B-F组大鼠内脏疼痛阈值显著升高(P<0.05);与C-B组比较,B-F组大鼠内脏疼痛阈值更高(P<0.05)。5.结肠病理:各组大鼠结肠组织均未见溃疡、水肿、炎细胞浸润等,符合IBS-D组织学表现。6.大鼠海马与结肠NGF、BDNF蛋白表达:与Con组比较,Mo组大鼠海马NGF、BDNF表达明显下降(P<0.05,P<0.05),结肠NGF、BDNF表达明显升高(P<0.05,P<0.05);与Mo组比较,C-B组大鼠海马NGF、BDNF表达增加(P>0.05,P>0.05),结肠NGF、BDNF表达降低(P>0.05,P>0.05),但差异无统计学意义;B-F组大鼠海马NGF、BDNF表达上升(P<0.05,P<0.05),结肠NGF、BDNF表达降低(P<0.05,P<0.05)。与C-B组比较,B-F组大鼠海马BDNF表达更高(P>0.05),结肠BDNF表达更低(P>0.05),海马NGF表达更高(P>0.05),但差异不明显,结肠NGF表达更低(P<0.05)。7.大鼠肠道菌群结构分析:在目水平上,与Con组比较,Mo组大鼠乳杆菌目、双歧杆菌目丰度下降(P<0.05,P<0.05),肠杆菌目丰度上升(P<0.05);与Mo组比较,C-B组双歧杆菌目丰度增加,肠杆菌目降低,但差异不明显(P>0.05,P>0.05),乳杆菌目明显增加(P<0.05)。B-F组较Mo组乳杆菌目、双歧杆菌目丰度增加(P<0.05,P<0.05),肠杆菌目丰度下降(P<0.05)。结论:1、痛泻要方之“抑木”组分白芍防风能降低IBS-D大鼠的内脏疼痛阈值。2、肠道菌群结构的改变及脑肠轴上NGF、BDNF在结肠、海马的差异化表达可能参与了IBS-D的内脏高敏感的形成。3、痛泻要方之“抑木”组分白芍防风可能通过改善肠道菌群结构、调整脑肠轴分子NGF、BDNF的表达,即调节菌群-肠-脑轴达到缓解IBS-D内脏高敏感性的效应。