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目的卵巢癌严重危害女性健康,死亡率居妇科恶性肿瘤的第一位,其中最常见的就是上皮性卵巢癌(epithelial ovarian cancer,EOC),其发展迅速,具有高转移性和化疗耐药性,这是治疗中难以攻克的问题。研究结果证实脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)/酪氨酸激酶受体B(tyrosine kinase receptor B,TrkB)信号转导通路通过激活下游的磷脂酰肌醇3激酶(Phosphatidyl Inositol 3-kinase,PI3K)/丙氨酸氨基转移酶(Alanine aminotransferase,Akt)通路,Ras/促分裂原活化蛋白激酶(MAP kinase,MAPK)通路等信号通路,参与多种肿瘤细胞的发生发展,与肿瘤细胞的增殖,耐药,侵袭转移以及肿瘤内血管生成等过程密切相关。在上皮性卵巢癌中TrkB及BDNF均过度表达,参与卵巢癌的增殖,侵袭迁移和抗失巢凋亡等过程,并与卵巢癌的分期及预后相关。应用酪氨酸激酶抑制剂K252a阻断该通路,可降低卵巢癌细胞的增殖能力和抗失巢凋亡能力,但是对于相关机制的研究较少。本研究的目的是:(1)探究BDNF/TrkB信号转导通路抑制剂K252a对卵巢癌SKOV3细胞增殖,凋亡,侵袭和转移,耐药性以及抗失巢凋亡的影响;(2)探究BDNF/TrkB信号转导通路抑制剂K252a在卵巢癌SKOV3细胞增殖,凋亡,侵袭和转移,耐药性以及抗失巢凋亡中可能的作用机制。方法1选择低转移性人卵巢浆液性乳头状囊腺癌细胞株SKOV3进行实验;2实验分为10组:1~5组:分别加入0 nmol/l、10 nmol/l、100 nmol/l、1000 nmol/l和2000nmol/l的K252a溶液培养24h;6~10组:分别加入0 nmol/l、10 nmol/l、100nmol/l、1000 nmol/l和2000nmol/l的K252a溶液培养48h;3 western blot法检测各组细胞磷酸化TrkB蛋白水平;4 MTT法检测细胞增殖;5 FCM检测细胞凋亡率;6 Transwell小室实验检测细胞侵袭和迁移能力;7应用顺铂和MTT法测定细胞对顺铂的敏感性;8应用体外失巢凋亡模型和流式细胞仪检测细胞的抗失巢凋亡能力;9 Real time-PCR法分别检测细胞中c-myc、脂肪酸合成酶(Fatty acid synthase,Fas)、Bcl-2、LPA2、核因子-κB(NF-κB)基因m RNA相对表达水平。结果1细胞内磷酸化TrkB蛋白检测结果:各组细胞磷酸化TrkB蛋白相对表达量分别为:0.1846±0.0161;0.1713±0.0096;0.1595±0.0199;0.0955±0.0281;0.0648±0.0210;0.1744±0.0172;0.1625±0.0060;0.1011±0.0165;0.0878±0.0115;0.0301±0.0069。结果显示,培养时间和K252a浓度对细胞中磷酸化TrkB蛋白表达水平有影响(P<0.05),细胞经2000nmol/l K252a培养48h后细胞内磷酸化TrkB蛋白相对表达量最低,与其他组相比具有显著差异(P<0.05),因此选择2000nmol/l K252a培养48h用于以下实验。2细胞增殖检测结果:对照组和实验组的OD490分别为0.749±0.078、0.419±0.026,实验组明显低于对照组(P<0.05),结果显示K252a能明显抑制SKOV3细胞的增殖。3细胞凋亡率检测结果:对照组和实验组细胞凋亡率分别为(4.180±0.838)%,(9.610±0.966)%,实验组明显高于对照组(P<0.05),结果说明K252a促进SKOV3细胞的凋亡。4细胞的侵袭和迁移能力检测结果:对照组和实验组侵袭细胞数分别为86.074±2.465,41.895±2.766,迁移细胞数分别为102.434±8.299,63.712±7.027,侵袭指数分别为84.029%,65.757%。实验组比对照组的穿膜细胞数明显减少(P<0.05),结果说明K252a抑制SKOV3细胞的侵袭和迁移能力。5细胞对顺铂的敏感性检测结果:对照组,K252a组,顺铂组,顺铂+K252a组的OD490分别为0.739±0.065,0.410±0.020,0.372±0.008,0.292±0.027。K252a组,顺铂组,顺铂+K252a组与对照组相比OD490明显下降(P<0.05),顺铂+K252a组明显低于顺铂组(P<0.05),结果说明K252a提高SKOV3细胞对顺铂的敏感性。6细胞的抗失巢凋亡能力检测结果:对照组凋亡率为(14.937±1.998)%,实验组为(36.100±2.632)%,实验组细胞凋亡率明显高于对照组(P<0.05),实验结果说明K252a降低SKOV3细胞抗失巢凋亡的能力。7细胞中Bcl-2、c-myc、LPA2、NF-κB、Fas基因m RNA表达水平检测结果:对照组Bcl-2、c-myc、LPA2、NF-κB、Fas基因m RNA的相对表达水平分别为1.0876±0.3237,1.0341±0.3044,1.0191±0.2274,1.0258±0.2640,0.8477±0.1186;实验组Bcl-2、c-myc、LPA2、NF-κB、Fas基因m RNA的相对表达水平分别为:0.4952±0.1501,0.4540±0.1918,0.5522±0.1284,0.2954±0.1594,1.9384±0.5408,与对照组相比,实验组Bcl-2、c-myc、LPA2、NF-κB基因表达水平降低,Fas表达水平增加(P<0.05)。结论1 K252a通过阻断BDNF/TrkB信号转导通路发挥体外抗卵巢癌细胞作用;2K252a阻断BDNF/TrkB信号转导通路,可能通过调控c-myc、Fas、Bcl-2、LPA2、NF-κB基因表达而发挥体外抗卵巢癌作用;