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目的：本研究主要观察维生素K3在体外诱导肝癌HuH7细胞氧化应激过程中对ERK通路和Keap1-Nrf2-ARE信号途径的影响;并采用关键分子的阻断剂观察ROS-ERK-Nrf2信号通路是否与维生素K3的抗肝癌效果存在一定的关联;初步探讨维生素K3抗肝癌的分子机制，从而为临床肝癌治疗提供一定的理论依据。 方法： 1.维生素K3诱导肝癌HuH7细胞氧化应激指标的检测。 随机将肝癌HuH7细胞分成四组:不同浓度（0μM、2μM、5μM、10μM）维生素K3作用组。上述浓度的维生素K3作用HuH7细胞24h后，用DCFH-DA免疫荧光法检测各实验组细胞内活性氧(reactive oxygen species，ROS)水平的变化;用分光光度法检测上述各组细胞内GSH、SOD和MDA水平的变化。 2.维生素K3对肝癌HuH7细胞ERK信号传导通路的影响。 不同浓度（0μM、2μM、5μM、10μM）维生素K3分别处理肝癌HuH7细胞48h后，蛋白印迹法检测上述各组细胞内ERK、磷酸化ERK水平，并进行剂量效应相关性分析。 3.维生素K3对肝癌HuH7细胞Ⅱ相酶诱导的信号通路的影响。 不同浓度（0μM、2μM、5μM、10μM）维生素K3分别处理肝癌HuH7细胞48h后，蛋白印迹法检测Keap1-Nrf2-ARE信号通路上Keap1蛋白、总Nrf2蛋白及其调控基因NQO1和HO-1蛋白水平表达的变化;蛋白印迹法检测Nrf2蛋白在胞浆与胞核的分布变化，并进行剂量效应相关性分析。 4.用关键分子阻断剂验证ROS-ERK-Nrf2信号通路是否与维生素K3反应相关联。 (1)肝癌HuH7细胞随机分为:空白对照组、ERK阻断剂(PD98059)组、10μM维生素K3组、10μM维生素K3+ERK阻断剂(PD98059)组;蛋白印迹法分别检测上述各组HuH7细胞内Nrf2、NQO1和HO-1蛋白表达变化。 (2)肝癌HuH7细胞随机分为:空白对照组、NQO1抑制剂Dicoumarol组、HO-1抑制剂ZNPPIX组、10μM维生素K3组、10μM维生素K3+ NQO1抑制剂 Dicoumarol组、10μM维生素K3+HO-1抑制剂ZNPPIX组;蛋白印迹法分别检测上述各实验组HuH7细胞内NQO1和HO-1蛋白表达变化。 (3)采用CCK-8法、流式细胞术等手段分析上述信号通路阻断剂联合应用对维生素K3作用肝癌细胞HuH7敏感性的影响。 结果： 1.DCFH-DA免疫荧光法检测发现:与0μM组相比较，上述不同浓度(2μM、5μM、10μM)维生素K3作用肝癌HuH7细胞24h后，胞内ROS水平明显增加，并呈现一定的浓度梯度依赖性;上述浓度的维生素K3作用肝癌HuH7细胞24h后，细胞内GSH和SOD的活性均明显提高(P均＜0.05），亦呈一定的浓度梯度依赖性;48h后上述各实验组细胞内GSH和SOD的活性均有不同程度降低(P均＜0.05 vs24 h)，呈一定的时间相关性。 2.不同浓度（2μM、5μM、10μM）维生素K3分别处理肝癌HuH7细胞48h后，磷酸化的ERK蛋白表达呈现渐进性升高，均高于0μM组（P均＜0.05），并呈一定的浓度梯度依赖性;但总ERK蛋白无明显改变（P均＞0.05）。 3.与0μM组相比，不同浓度(2μM、5μM、10μM)维生素K3与肝癌HuH7细胞共同孵育48h后，上述各实验组细胞内Nrf2、NQO1和HO-1的蛋白表达显著提高(P均＜0.05），并呈一定的浓度梯度依赖性;而Keap1蛋白表达无明显变化(P均＞0.05）;与此同时，上述各实验组细胞胞浆内Nrf2蛋白表达显著下降(P均＜0.05)，而细胞核内Nrf2蛋白表达显著上升（P均＜0.05），并均呈现一定的浓度梯度依赖性。 4.蛋白印迹检测发现:ERK通路的特异性阻断剂(PD98059)可以明显抑制维生素K3诱导的肝癌细胞HuH7胞内Nrf2、NQO1和HO-1蛋白表达（P均＜0.05）;同时维生素K3诱导的NQO1和HO-1的蛋白表达还可分别被特异的NQO1抑制剂Dieoumarol、HO-1抑制剂ZNppIX所抑制(P均＜0.05); CCK-8法和流式细胞检测凋亡发现:ERK阻断剂(PD98059)、NQO1阻断剂(Dicoumarol)、HO-1阻断剂(ZNPPIX)均可提高维生素K3作用肝癌HuH7细胞的敏感性(P均＜0.05)。 结论: 1.维生素K3在肝癌HuH7细胞中可通过激活ROS-ERK-Nrf2信号通路从而上调Ⅱ相代谢酶NQO1和HO-1蛋白表达水平，并且呈一定的浓度和时间依赖性。 2.ROS-ERK-Nrf2信号通路可能与维生素K3抗肝癌反应存在一定的关联。