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研究目的:高盐饮食(high salt diet, HS)不仅是高血压的致病因素,还能独立于血压水平造成靶器官损害。炎症反应是靶器官损害的中心环节,而单核/巨噬细胞是引发靶器官炎症反应的主要细胞类型。近年来研究显示,单核细胞由三个亚群组成(经典型,CD14++CD16单核细胞[Monl];中间型,CD14++CD16+单核细胞[Mon2];非经典型,CD14+CD16++单核细胞[Mon3])。不同亚群的单核细胞具有不同的生理和病理生理学作用。其中CD14++CD16+型单核细胞被认为是“促炎症型单核细胞”,与动脉粥样硬化(atherosclerosis, AS)的形成密切相关。此外,单核细胞还可与血小板结合形成单核细胞-血小板聚集体(monocyte-platelet aggregates, MPA),通过相互作用共同参与多种病理过程。高盐饮食是否能够对单核细胞表型以及MPA的形成产生影响,进而通过增加“促炎症型单核细胞”的数量和MPA的形成来加重靶器官损害,尚未见到相关报道。因此,本研究旨在对健康志愿者进行不同食盐含量的饮食干预,观察食盐摄入量的变化对外周血单核细胞亚群表型的动态影响,并探讨其相关机制。研究内容与方法:共纳入健康志愿者22人。男性10人,平均30.10±2.99岁;女性12人,平均29.40±2.65岁。先后给予高盐饮食(15g/d)7天和低盐饮食(5g/d)7天。所有饮食均由研究组提供,并在同一地点进餐。在基线最后一天、高盐饮食第一天、高盐饮食第七天、低盐饮食第三天、低盐饮食第七天收集24小时尿。分别在基线最后一天,高盐饮食第二天、高盐饮食第七天、低盐饮食第二天,低盐饮食第七天采集受试者外周血进行单核细胞亚群和MPA的流式细胞术(flow cytometry, FCM)检测,对单核细胞表型和血小板标志分子CD14.CD16,CD86和CD41进行四色分析。对基线最后一天,高盐第七天和低盐第七天采集外周血使用密度梯度离心法分离外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell, PBMC),并采用磁性细胞分选技术(magnetic activated cell sorting, MACS)以CD14阳性分选免疫磁珠纯化单核细胞。使用TRIzol试剂裂解纯化后的单核细胞,提取总RNA;采用实时荧光定量聚合酶链反应(Real-TimePCR)对单核细胞炎症相关因子和炎症抑制因子的基因表达水平进行检测,包括:C-C趋化因子配体5(CCL5)、C-C趋化因子受体5(CCR5)、单核细胞趋化因子-1(MCP-1)、C-C趋化因子受体2(CCR2)、转化生长因子-β(TGF-β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、核因子-κB(NF-κB)、C-X3-C趋化因子受体1(CX3CR1).精氨酸酶-1(Arg-1)、P选择素糖蛋白配体-1(PSGL-1)。采用放免法分析(radioimmunoassay)测定血浆肾素活性(PRA)、血浆中血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)、醛固酮(ALD)、胰岛素(Ins)、C-肽(C-P)含量。使用循环酶法检测血浆同型半胱氨酸浓度。结果:22名健康志愿者中,一人因不能耐受高盐饮食退出研究,一人因在高盐期出现频发室性早搏,研究者认为不能继续实验。其余20名志愿者完成全部饮食干预及血液和尿液的有关检测,并根据24小时尿量、尿钠总量、尿肌酐总量以及血钠水平等指标进行质量控制并判定所得实验数据可靠。(1)血压、心率的变化:收缩压(systolic blood pressure, SBP)、舒张压(diastolic blood pressure, DBP)在基线水平、高盐饮食第一天、高盐饮食第七天、低盐饮食第一天和低盐饮食第七天无显著性变化(P=0.6677和P=0.4915)。而心率在这五个时间点比较有统计学差异(P=0.0007),其中高盐饮食第一天、第七天较基线水平显著性增快(P<0.05),而低盐饮食时回落至基线水平(P>0.05)。(2)血糖代谢相关变化:与基线水平比较,血浆胰岛素水平、胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)和胰岛素敏感指数(QUICKI)在高盐和低盐饮食后均无明显变化(P分别等于0.0655,0.2529,0.5057)。而C-肽水平和胰岛β细胞功能指数(HOMA-β)在基线、高盐和低盐饮食后均有统计学差异(P<0.0001;P=0.0008)。其中高盐饮食末较基线水平显著降低(P<0.05),低盐饮食末回升,并且HOMA-β升高有统计学意义(P<0.05)。(3) RAAS系统相关变化:与基线水平比较,血浆肾素活性和AngⅡ水平在高盐和低盐饮食后均无明显变化(P=0.5315和P=0.1100)。血浆ALD水平在三个时间点比较有显著性变化(P=0.0436),其中高盐饮食末较基线水平显著性降低(P<0.05);低盐饮食7d回升至基线水平。(4)单核细胞亚群变化:外周血单核细胞总数和CD14++CD16型单核细胞(经典型单核细胞,Monl)在低盐饮食第一天轻度增加,其余各时间点无明显变化(P总数=0.0199,PMon1数量=0.0264)。CD14+CD16++型单核细胞(非经典型单核细胞,Mon3)数量和比例在低盐饮食第七天略有增加(P<0.05),其余各时间点无明显变化(P分别为0.0002,0.0122)。CD14++CD16+型单核细胞(中间型单核细胞,Mon2)数量和比例在高盐饮食第一天明显增加,并持续增多至低盐饮食第一天(P均<0.0001),其中高盐饮食第一天与其他各时间点比较均有统计学差异(P均<0.0001)。(5)MPA的形成变化:MPA数量在高盐饮食第一天显著增多并伴有比例升高,持续增多至低盐饮食第一天(P均<0.0001),分别与基线、低盐饮食第七天比较均有统计学差异(P均<0.05);CD14++CD16+型单核细胞形成MPA比例在高盐饮食第一天和低盐饮食第一天显著升高,并有统计学差异(P=0.0002)。CD14++CD16+型单核细胞形成MPA的比例在高盐饮食第一天显著增多,高盐饮食第七天达到顶峰,一直持续到低盐饮食第一天(P<0.0001)。其中高盐饮食第一天、第七天与其他各时间点比较均有统计学差异(P均<0.05)。而低盐饮食第七天较基线显著性降低(P<0.001)。不仅如此CD14++CD16+型单核细胞在5个时间点形成MPA的比例均较其他2型单核细胞高,分别占(32.53±6.68)%,(47.92±14.89)%,(55.12±12.08)%,(64.09±17.88)%,(19.15±7.89)%。CD14+CD16++型单核细胞在五个时间点形成MPA的比例无明显变化(P=0.2254)。(6)单核细胞相关基因变化:MCP-1、CCL5、NF-κB、TGF-β和CX3CR1等基因mRNA表达水平在高盐饮食末分别升高至基线的1.16倍、2.22倍、1.15倍、1.06倍和1.03倍。低盐饮食末均回落至基线水平。其中CCL5、NF-κB升高有统计学意义(P<0.05)。Arg-1基因mRNA的表达水平在高盐饮食末降低至基线的0.64倍。低盐饮食末升高至基线的1.22倍,与高盐饮食末比较也显著升高(P=0.0403)。PSGL-1在高盐饮食末的表达水平与基线水平比较无统计学意义(P=0.0553),而低盐饮食末的水平较基线、高盐饮食末显著性降低(P<0.0001和P=0.0262)。结论:本研究首次证实高盐饮食能够引起人循环中CD14++CD16+型单核细胞及单核细胞与血小板聚集体数量的增加,并伴有单核细胞炎性相关基因表达的上调,同时上述效应可被低盐饮食所逆转。本研究提出了基于单核细胞亚群失衡的高盐摄入靶器官损伤新机制,为相关疾病的防治提供了新的理论基础和人群研究证据。