遗传性非息肉病性结直肠癌是最常见的一种遗传性肿瘤，该类肿瘤具有较明确的遗传基因，以常染色体显性方式遗传，家族中表现为以大肠癌为主的多种肿瘤发病率增高。临床上有多个诊断标准用来诊断这一疾病，如经典的Amsterdam标准Ⅰ和Ⅱ，可疑HNPCC标准，日本HNPCC标准，中国人HNPCC标准。研究表明，以Amsterdam标准诊断的HNPCC约占全部大肠癌的1-5％。国内的血缘家系相比于国外有家系成员人数少，对祖代成员疾患了解少等特点。因此，国内家系HNPCC的诊断率可能比国外低。在经典的教科书中，HNPCC被定义为由错配修复基因遗传性突变引起的以大肠癌为主的多种肿瘤发病风险增高的常染色体显性遗传病。在这一描述中，错配修复基因突变是HNPCC的始因，多种肿瘤发病风险增高是HNPCC的主要表现。然而，HNPCC的表现并不像理论上认为的那么简单。并非所有临床诊断的HNPCC均携带有错配修复基因突变，并非所有突变携带者都会发生肿瘤。错配修复基因的变异是如何导致HNPCC的发生的，HNPCC特殊的发病机制与特殊的临床病理表现有何种联系，这些都是需要进一步研究的问题。而对于国人，如何找到一种适于中国人小家系的HNPCC诊断方法也是需要研究的问题。如果我们发现了HNPCC家系，如何对其进行随访观察，对家系中的患者或突变携带者采取何种干预或治疗措施亦需要进一步研究。散发性肿瘤最令人费解的一个问题便是肿瘤发生的始动原因，但对于HNPCC来说，其发病的始动原因相对较明确。绝大部分的HNPCC属于微卫星不稳定肿瘤，而错配修复基因的变异是导致微卫星不稳定的主要原因。但常规检测到的微卫星不稳定并不是致病的直接因素，而可能是特殊的致癌通路的外在表现。除HNPCC外，微卫星不稳定肿瘤也可发生在散发性大肠癌和散发性胃癌，而胃癌是中国人群中HNPCC相关的第二大肿瘤。因此，在目前国内收集大量HNPCC肿瘤标本相对困难情况下，进一步研究微卫星不稳定胃肠道肿瘤，对于更深入的了解HNPCC具有积极意义。国外系统的开展HNPCC研究的国家主要有荷兰，英国和韩国，因为在这些国家有全国性的胃肠道遗传性肿瘤登记系统。其标本和研究样本量往往是较大的。而国内的研究往往样本量小而分散，缺少对国人HNPCC较系统的研究。本研究的目的在于通过对国人HNPCC家系从HNPCC诊断方法的应用、遗传基因变异的检测、临床病理表现特征的分析、家系的随访到HNPCC发病机制的初探这些研究，较全面地了解国人HNPCC临床和遗传的情况，并建立起一套适合于国人HNPCC的家系诊断、基因检测的方法。同时建立HNPCC家系数据库，继续收集整理HNPCC家系，监测各家系成员发病情况。本研究分为5个部分：第一部分DHPLC检测hMSH2／hMLH1基因点突变和甲基化及肿瘤微卫星不稳定技术平台的建立目的：建立起DHPLC检测hMSH2／hMLH1基因突变，hMLH1启动子区甲基化和DNA微卫星不稳定的稳定可靠的技术平台，使检测的操作过程相对标准化。方法：通过对已有的hMSH2／hMLH1基因突变阳性和阴性标本，hMLH1启动子区甲基化阳性和阴性标本和DNA微卫星不稳定阳性和阴性标本，自行设计PCR引物扩增相应DNA片段，DHPLC上样检测，在试验中不断调整参数设置，优化检测方法。结果：成功建立起DHPLC检测基因点突变、基因甲基化和基因组微卫星不稳定的方法。结论：DHPLC检测基因点突变、基因甲基化和微卫星不稳定具有方法相对简便，检测效率高，重复性好，自动化的优点，适于推广应用。第二部分临床诊断的HNPCC家系遗传性hMSH2／hMLH1基因变异的检测目的：针对中国人HNPCC临床诊断标准，对已收集的中国人HNPCC患者进行hMLH1和hMSH2错配修复基因的基因点突变和大片段重组两方面遗传检测，以说明符合中国人HNPCC标准的HNPCC患者和家系成员遗传突变检出率。方法：14个符合中国人HNPCC诊断标准的HNPCC先证者及家系成员外周血样本，提取外周血基因组DNA，DHPLC方法检测hMSH2／hMLH1基因点突变，多重PCR定量分析方法检测hMSH2／hMLH1基因大片段重组。确定突变阳性家系成员的突变携带率。结果：14个HNPCC先证者中发现3个遗传的病理性点突变，1个遗传性基因大片段缺失，突变检出率为28％。2个突变阳性家系中家系成员突变携带率为6／7和5／7。结论：符合中国人HNPCC标准的HNPCC家约有1／3可检出遗传性基因突变，基因大片段重组也是基因遗传性突变的方式之一。HNPCC家系成员的突变携带率可能高于1／2。第三部分微卫星不稳定分子途径诊断HNPCC家系的研究目的：验证微卫星不稳定分子途径诊断HNPCC的可行性和效率，发现无家族史的HNPCC患者。方法：收集303例非选择性大肠癌，DHPLC方法检测MSI-H大肠癌，DHPLC检测MSI-H大肠癌患者遗传性hMSH2／hMLH1基因突变。由检出突变的人群频率鉴定突变性质。结果：303例大肠癌中发现31例MSI-H肿瘤，31例MSI-H大肠癌中检出6例存在hMSH2／hMLH1基因病理性突变，其中4例为遗传性突变，诊断为HNPCC。4例HNPCC中3例符合中国人HNPCC标准。1例不符合任何标准，且无家族史。结论：微卫星不稳定分子途径诊断HNPCC方法切实可行。此方法可发现无家族史的突变阳性HNPCC病例。在非选择性大肠癌中，突变阳性HNPCC检出率约为1.3％。第四部分微卫星不稳定大肠癌&微卫星不稳定胃癌临床病理和分子特征的比较研究目的：找出微卫星不稳定胃肠道癌的异同点，发现与MSI联系最紧密的临床病理特征。方法：收集303例大肠癌和288例胃癌组织标本，BAT25和BAT26微卫星位点确定MSI-H大肠癌和MSI-H胃癌。分析MSI-H大肠癌和MSI-H胃癌与各自MSS肿瘤相比较的临床病理特征，检测MSI-H大肠癌和MSI-H胃癌的MMR基因变异。结果：发现31例MSI-H大肠癌和19例MSI-H胃癌，MSI-H大肠癌有发病年龄小、低分化癌多见、右侧结肠癌多见、局部淋巴结转移少、局部侵润少和预后好等特点，MSI-H胃癌仅有好发于胃窦部和局部淋巴结转移少的特点。6／31MSI-H大肠癌&0／19MSI-H胃癌存在hMSH2／hMLH1基因点突变，6／31MSI-H大肠癌和15／19MSI-H胃癌存在hMLH1基因启动子区高甲基化。结论：局部淋巴结转移少是MSI-H大肠癌和MSI-H胃癌的共同特点。基因甲基化是MSI-H胃癌的主要原因。hMSH2／hMLH1基因点突变和hMLH1甲基化均是MSI-H大肠癌的原因之一，但不是主要原因。第五部分HNPCC长期生存率的回顾性分析目的：找出符合中国人HNPCC标准与其他标准诊断的HNPCC患者10年长期生存率的异同，并比较HNPCC与散发性肿瘤的长期生存率差别。方法：回顾性分析102个伴有家族史的大肠癌病例，所有大肠癌都有10年以上可靠的随访资料和完整的临床病理资料。以各类HNPCC临床诊断标准分类病例，比较长期生存率。同期记录673例散发大肠癌的10年生存资料，对比分析。结果：符合Amsterdam Ⅰ标准、Amsterdam Ⅱ标准、中国人HNPCC标准、Bethesda Guildline和非典型家族性大肠癌的10年生存率分别为71.4％、100％、88％、71.2％和67.4％，各组生存率无统计学差别。散发性大肠癌10年生存率为50.7％，生存率显著低于HNPCC。结论：中国人HNPCC标准诊断的HNPCC患者与其他标准诊断的HNPCC患者10年生存率无差别，HNPCC患者的10年生存率显著优于散发大肠癌。