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松树皮提取物含有丰富的多酚类化合物,尤其是原花青素是迄今发现的功效最强的自由基清除剂之一。现代医学已经证明,氧自由基几乎和人类大部分疾病都有关系,包括人类死亡率最高的心脑血管疾病。当供应心脏血液的冠状动脉突然发生痉挛的时候,心肌细胞由于缺氧而发生一系列的代谢改变,心肌细胞内抗氧化剂含量减少,使生成氧自由基的化学反应由于缺氧而相对加快。在冠状动脉痉挛消除的一刹那,心肌细胞突然重新得到血液的灌注,随之而来有大量的氧转化成氧自由基,而同时由于抗氧化剂的相对不足,不能够清除氧自由基,结果使具有高度杀伤性的氧自由基严重损伤心肌细胞膜,大量离子由心肌细胞内溢出,而后者可以扰乱控制心脏搏动的电流信号,引起心室颤动,从而导致死亡。目的:通过从松树皮中提取的原花青素,从整体动物模型及细胞水平（内皮细胞）,研究松树皮提取物原花青素对抗心肌缺血的药理作用及机制,为临床提供用药依据,为新药研发提供药效学基础。方法:1、将实验动物随机分为模型组、阳性对照硝酸甘油组（0.083 mg/kg）、松树皮提取物原花青素低、中、高（120.0、180.0、240.0mg/kg）共五组,进行小鼠常压耐缺氧、小鼠脑缺血及对抗亚硝酸钠中毒实验,记录小鼠存活时间。2、垂体后叶素诱发大鼠实验性心肌缺血:筛选心电正常的SD大鼠,随机分为6组,每组8只。分别为正常对照组,模型对照组,硝酸甘油组（0.042 mg/kg）,松树皮原花青素低（60mg/kg）、中（90mg/kg）、高（120mg/kg）剂量组。其中,正常对照组和模型对照组给予等容量生理盐水。灌胃给药,剂量1ml/100g,每天1次,连续灌胃14d。末次给药后1h,各组大鼠分别腹腔注射（ip）10%水合氯醛0.35 g/kg麻醉。仰卧位固定于手术台上,将心电图机针状电极插入四肢皮下,稳定后记录正常Ⅱ导联心电图,作为给药前值。除正常对照组外,其余各组大鼠舌下静脉注射垂体后叶素（pituitrin,pit）0.75U/kg,给药容积为1.0ml/kg,并于5s内注射完毕,造成急性心肌缺血模型,正常对照组给予等容量生理盐水。记录注射垂体后叶素后5s、10s、15s、30s、60s、90s、120s时的心电图变化,同时测定血清中丙二醛（MDA）含量和乳酸脱氢酶（LDH）活性。3、对心肌缺血再灌注损伤大鼠的保护作用:实验前记录Ⅱ导联心电图,筛选心电正常的SD大鼠,随机分为6组:假手术组、模型组、阳性对照组、原花青素低、中、高浓度组,每组20只。假手术组和模型组:灌胃给予等体积生理盐水;阳性对照组:给予硝酸甘油0.042mg/kg;原花青素低、中、高（60.0、90.0、120.0mg/kg）组分别给予不同浓度的原花青素灌胃液。灌胃容量1ml/100g,每天1次,连续灌胃14d。根据文献,建立心肌缺血再灌注模型,记录心电图变化、心肌酶指标、缺血范围、病理形态变化,观察心肌细胞的凋亡。4、在分子水平上,利用人脐静脉内皮细胞的两个损伤模型:①Ox-LDL损伤内皮细胞模型;②H2O2损伤内皮细胞模型。LDL经氧化修饰生成氧化型低密度脂蛋白（ox-LDL）,ox-LDL可通过致VEC凋亡途径损伤血管内皮。因此,我们复制ox-LDL诱导的人脐静脉血管内皮细胞（HUVEC）损伤模型,采用中药血清药理学的方法观察含药血清对ox-LDL损伤HUVEC的保护作用。氧化应激损伤广泛存在于内皮细胞损伤中,与动脉粥样硬化的形成之间有密切关系。为此,我们又建立过氧化氢（H2O2）损伤模型。结果:1、小鼠常压耐缺氧、小鼠脑缺血及对抗亚硝酸钠中毒实验,记录小鼠存活时间;垂体后叶素诱发大鼠实验性心肌缺血,记录大鼠心电图变化;对心肌缺血再灌注损伤大鼠的保护作用,记录心电图变化、心肌酶指标、缺血范围、病理形态变化,观察心肌细胞的凋亡。实验结果显示,松树皮提取物原花青素具有耐缺氧,抗脑缺血,抑制缺血时MDA及LDH的释放,心肌SOD活性明显回升,ET-1和IL-6明显下降,差异均有统计学意义,且呈剂量依赖性,减少心肌梗死范围,2、①原花青素对Ox-LDL损伤内皮细胞模型的保护作用:高浓度的ox-LDL:对HUVEC有细胞毒性作用;低浓度的ox-LDL:可以促进细胞增殖。ox-LDL损伤HUVEC后,活力明显下降,LDH漏出增多。用含原花青素的血清预处理24h后,ox-LDL损伤减轻。原花青素含药血清可以提高细胞抗氧化能力,增加SOD的活性,减少脂质过氧化物MDA的产生。原花青素含药血清能改善血管内皮细胞分泌功能,能升高NO、PGI2水平,降低ET和TXA2水平,可减少细胞凋亡。②原花青素对H2O2损伤内皮细胞模型的保护作用:H2O2能浓度依赖性降低HUVEC的增殖活力;原花青素含药血清能提高H2O2损伤时血管内皮细胞活力,改善细胞形态,减少细胞凋亡,对内皮细胞有保护作用,其可能作用机制与升高NO水平有关。结论:松树皮提取物原花青素对心肌缺血有很好的保护作用,能增加SOD活力,促进内皮细胞合成NO,减少脂质过氧化物MDA的产生,抑制缺血时ET-1和IL-6的下降,抑制细胞凋亡,抗过氧化作用,对进一步的临床试验和研究有参考作用。