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沙地云杉(Picea mongolica(H.Q.Wu))是内蒙古巴音敖包自然保护区特有针叶树种,有较高的综合利用价值。研究该树种的离体繁殖技术,建立快速繁殖体系,能够为该树种的遗传改良研究和开展生物工程工作奠定理论和技术基础。本文以沙地云杉成熟胚为外植体,研究了灭菌时间、不同浓度的消毒液对成熟胚存活率的影响,并进一步探索了沙地云杉胚性愈伤组织发生途径及在此过程中愈伤组织蔗糖含量和蔗糖酶活力的变化规律。主要结果如下:1.沙地云杉外植体的最佳消毒方案是以70%酒精处理30s后,用10%次氯酸钠处理10min。其污染率最低,存活率最好,起到了理想的灭菌效果。2.沙地云杉愈伤组织诱导的最佳激素组合为0.5mg/L 6-BA,5.0mg/L 2,4-D;增殖培养最佳激素组合为1.0mg/L6-BA,0.5mg/L2,4-D;沙地云杉愈伤组织分化培养基为LS+20g/L蔗糖+3mg/LABA+50g/LPEG4000。3.在沙地云杉的愈伤组织诱导阶段、增殖阶段和成熟培养阶段中,愈伤组织内蔗糖含量均在培养第6d时达到最高值。其中诱导阶段含量达13.90%,增值阶段达5.28%,分化阶段达6.2%。4.蔗糖转化酶的变化。在胚性愈伤组织诱导阶段、增殖阶段和分化培养阶段,蔗糖酸性转化酶在第6d时最高,分别达到52.42U/g、86.26U/g和125.65U/g。在胚性愈伤组织诱导阶段,碱性转化酶活力第6d时最高,为47.37U/g,增殖阶段和分化阶段第3d时达最高,分别为74.14U/g,67.07U/g。5.以沙地云杉合子胚为外植体进行愈伤诱导过程中,在增殖阶段,坚硬绿色非胚性愈伤组织蔗糖含量、蔗糖酶活力都高于白色丝状胚性愈伤组织;在分化成熟阶段,绿色芽点发生率高的胚性愈伤组织中蔗糖含量、蔗糖酶活力高于表面坚硬的绿色非胚性愈伤组织。