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目的:食管癌是发生在食管上皮组织的恶性肿瘤,在发展中国家大多数食管癌为食管鳞状细胞癌(esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)。我国华北太行山地区就分布着世界上发病率和死亡率较高的地区,该病发病隐蔽,出现症状就诊时多数患者已经进入临床中晚期,每年死于食管癌的患者约有几十万人。为降低食管癌的发病率和死亡率,研究其发病机制成为研究难点之一。近年来以DNA甲基化为代表的表观遗传学改变成为研究肿瘤发病机制的热点。本实验通过研究wif-1、dkk3、sfrp1、sfrp2、sfrp4和sfrp5基因在食管鳞癌及癌旁正常组织中的甲基化情况,及其在食管鳞癌和癌旁正常组织中的mRNA表达请况,探讨基因的甲基化与食管鳞癌的发生、转移和分化程度等之间的关系,从而为研究食管鳞癌的发病机制和临床预后等方面提供新的理论和实验依据。方法:1、采用甲基化特异性PCR(methylation specificPCR, MSP)方法检测65例食管鳞癌组织及30例相应癌旁正常组织中wif-1、dkk3、sfrp1、sfrp2、sfrp4和sfrp5基因的甲基化情况。2、采用逆转录-聚合酶链反应(reverse transcriptase PCR, RT-PCR)方法检测20例食管鳞癌组织及10例相应癌旁正常组织中wif-1、dkk3、sfrp1、sfrp2、sfrp4和sfrp5基因mRNA的表达水平。3、运用统计软件SPSS 13.0对数据进行统计学分析。结果:1、wif-1、dkk3、sfrp1、sfrp2、sfrp4和sfrp5基因在65例食管鳞癌标本和30例对应的癌旁正常组织中的甲基化情况,及各基因甲基化情况与标本临床病理资料分析。wif-1基因在ESCC组织和癌旁正常组织中的甲基化率分别为27.7%(18/65)和0%(0/30),差异有统计学意义(p<0.05)。dkk3基因在ESCC组织中的甲基化率为32.3%(21/65),显著高于癌旁正常组织0%(0/30)(p<0.05)。sfrp1基因在ESCC组织和癌旁正常组织中的甲基化率分别为67.7%(44/65)和43.3%(13/30),差异有统计学意义(p<0.05)。sfrp2基因在ESCC组织中的甲基化率69.2%(45/65)显著高于癌旁正常组织36.7%(11/30),差异有统计学意义(p<0.05)。sfrp4基因在食管鳞癌组织中的甲基化率为66.2%(43/65),显著高于癌旁正常组织6.7%(2/30)(p<0.05)。sfrp5基因在食管鳞癌和癌旁正常组织中的甲基化率分别为57.0%(37/65)和6.7%(2/30),差异有统计学意义(p<0.05)。wif-1、dkk3、sfrp1、sfrp2和sfrp5基因的甲基化情况与患者的年龄、性别、临床分期、病理分级和有无淋巴结转移等临床资料无关,差异无统计学意义(p>0.05)。sfrp4基因在病理分级高、中分化组中的甲基化率为74.5%(41/55),高于低分化组中的甲基化率30.0%(3/10),统计学差异显著(p=0.006,p< 0.05)。2、wif-1、dkk3、sfrp1、sfrp2、sfrp4和sfrp5基因在20例食管鳞癌组织和10例相应癌旁正常组织中mRNA表达的变化wif-1基因在癌组织中的mRNA表达量为0.67±0.32,在正常组织中为0.95±0.23,有统计学差异(p< 0.05)。dkk3基因在癌组织中的mRNA表达量为0.62±0.22,低于其在正常组织中表达量0.86±0.33,差异有统计学意义(p< 0.05)。sfrp1基因在癌组织中的mRNA表达量(0.66±0.35)低于正常组织(0.93±0.19),有统计学差异(p< 0.05)。sfrp2基因在癌组织中的mRNA表达量为0.62±0.19,在正常组织中为0.89±0.32,差异有统计学意义(p< 0.05)。sfrp4基因在癌组织中的mRNA表达量为0.67±0.29,低于其在正常组织中的表达量0.93±0.16,差异有统计学意义(p< 0.05)。sfrp5基因在癌组织中的mRNA表达量(0.59±0.23)低于正常组织(0.92±0.36),有统计学差异(p< 0.05)。3、20例食管鳞癌组织中各基因的甲基化情况与其mRNA表达之间的关系食管鳞癌组织中wif-1、dkk3、sfrp1、sfrp2、sfrp4和sfrp5基因发生甲基化的标本中其mRNA表达量比未发生甲基化的mRNA表达量低,但差异均无统计学意义(p>0.05)。结论:1、食管鳞癌组织中wif-1、dkk3、sfrp1、sfrp2、sfrp4和sfrp5基因的甲基化率显著高于癌旁正常组织,提示这六种基因的甲基化状态可能与食管鳞癌密切相关。2、sfrp4基因在食管鳞癌高中分化组中的甲基化发生率显著高于低分化组,提示sfrp4可能与食管鳞癌的高侵袭性有关。3、wif-1、dkk3、sfrp1、sfrp2、sfrp4和sfrp5基因mRNA相对表达量在ESCC组均显著低于癌旁正常组。提示这六种基因mRNA表达异常可能与ESCC的发生有关。4、wif-1、dkk3、sfrp1、sfrp2、sfrp4和sfrp5基因mRNA相对表达量在甲基化阳性的ESCC组与甲基化阴性的ESCC组中差异无统计学意义。提示甲基化可能不是导致mRNA表达异常的主要原因。