目的：构建人生存素(Survivin)、转化生长因子β3(TGFβ3)、基质金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP-1)三基因过表达慢病毒载体,通过一次转染,实现Survivin、 TGFβ3、 TIMP-1三基因在人退变椎间盘髓核细胞的稳定转染,通过抑制细胞凋亡、增加细胞外基质的合成及抑制其降解,实现逆转或延缓椎间盘退变的目的。方法：构建Survivin、TGFβ3、TIMP-1慢病毒载体,联合转染人退变髓核细胞,应用Real-Time PCR技术检测转染后三基因的过表达情况,并检测蛋白多糖和Ⅱ型胶原的mRNA表达量,应用Western blot检测蛋白多糖和Ⅱ型胶原的蛋白含量,应用caspase-3活性检测试剂盒检测caspase-3蛋白活性,应用Annexin V-PI双染色法检测髓核细胞凋亡率。结果：人退变髓核细胞稳定转染后,Real-Time PCR结果显示Survivin TGF β3、TIMP-1三基因在基因水平均获得稳定过表达,且其表达能维持细胞传至P3代或更长时间。目的病毒转染组(A组)较空病毒转染组(B组)、空白对照组(C组),蛋白多糖和Ⅱ型胶原：mRNA表达量均无明显差异,Western blot示蛋白多糖和Ⅱ型胶原蛋白含量三组无明显差异,Caspase-3蛋白吸光度及髓核细胞凋亡率三组亦无明显差异。结论：Survivin、TGFβ3、TIMP-1慢病毒载体能够稳定转染人退变椎间盘髓核细胞,并且能长时间维持其表达,发挥生物学效应,三基因对在体外培养的髓核细胞的细胞外基质的合成并无明显的作用,对细胞凋亡亦无明显抑制作用。在体外,通过Survivin、TGFβ3、TIMP-1慢病毒载体转染人退变髓核细胞并不能有效增加蛋白多糖和Ⅱ型胶原的含量,亦不能有效抑制髓核细胞凋亡。而在体内环境中,三基因联合转染的作用,仍需进一步研究。