雷竹PvPin1基因的功能分析

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竹类植物作为禾本科植物中的一员,其生长周期长,开花时间不确定,且开花后立即死亡等开花特性不同于普通禾本科植物,这些开花特性使得对竹类植物开花机理的解释变得困难;同时竹产业在消除贫困和经济发展中扮演越来越重要的角色,然而竹子开花会使竹产业的经济效应显著下滑。故研究竹子开花具有较高的理论意义和社会经济价值。拟南芥PIN1-type parvulin 1,Pin1At作为开花激活者,通过加速SOC1和AGL24中磷酸化的丝氨酸/苏氨酸-脯胺酸基团顺反异构来调控成花转变。竹类植物中Pin1At同源基因是否影响竹子开花尚不清楚。本文针对PvPin1基因进行了内含子克隆、转化拟南芥和水稻、启动子克隆及活性分析、亚细胞定位等实验。结果表明:(1)PvPin1蛋白与单子叶植物中的Pin1-like蛋白可聚为一类,其中PvPin1与毛竹Pin1-like亲缘关系最近。PvPin1蛋白与植物中的Pin1-like蛋白结构相似,都只含有一个催化域而不含有WW功能域。(2)PvPin1的基因结构与玉米(Zea mays)、水稻(Oryza sativa)、大豆(Glycine soja)、拟南芥(Arabidopsis thaliana)、葡萄(Vitis vinifera)、荷花(Nelumbo nucifera)、烟草(Nicotiana attenuata)中的Pin1同源基因的基因结构相似,都只含有一个内含子。(3)通过在拟南芥中过量表达PvPin1,发现T3代转基因拟南芥纯合株系较野生型拟南芥有显著性的晚花表型;同时发现PvPin1可能通过下调SOC1和AGL24的表达水平来延迟转基因拟南芥开花。(4)通过在水稻中过量表达PvPin1,发现T3代转基因水稻纯合株系同野生型水稻相比有显著的晚花表型;同时发现PvPin1可能通过上调OsMADS56的表达水平使转基因水稻延迟抽穗。(5)亚细胞定位实验表明Pv Pin1-GFP的绿色荧光蛋白主要分布于细胞膜上,细胞核中也有少量分布。(6)克隆得到1500bp的PvPin1启动子序列;启动子活性分析表明ABA和MeJA可以抑制PvPin1的表达。综上,PvPin1可能是雷竹中的开花抑制因子。
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