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第一部分脂联素促进Th17细胞的分化参与CIA小鼠发病机制的研究目的:我们既往研究发现在类风湿关节炎(Rheumatoid arthritis,RA)患者外周血、关节液及滑膜组织中脂联素(Adiponectin,AD)的水平显著增高,但机制不明;在体外实验中我们发现AD能促进naive T细胞向TTh17细胞分化。在本部分实验中,我们将通过体内实验观察AD对胶原诱导的关节炎(Collageninduced arthritis,CIA)小鼠关节炎症状及关节组织中Th17比例的影响。方法:构建CIA模型,首次免疫后17、20及23天关节腔内注射AD。Micro-CT观察AD对CIA小鼠关节结构的影响。流式细胞术、Real-time PCR及免疫组化检测CIA小鼠关节组织中AD、Th17细胞比例及其分化相关细胞因子的变化。结果:CIA小鼠关节局部高表达AD后,骨侵蚀显著加重,骨密度明显降低。CIA小鼠关节组织中Th17细胞的比例显著增高,其分化相关的细胞因子白细胞介素(Interleukin,IL)-22 及 IL-23 表达上调。结论:在慢性炎症状态下,关节组织中增高的AD是促进Th17细胞的分化的重要信号分子,其在RA炎症反应及骨侵蚀中发挥重要作用。第二部分局部沉默AdipoR1对CIA小鼠关节组织Th17细胞分化的影响目的:本课题组近十年来一直研究AD在RA中的作用。我们首先报道RA关节中高表达的AD参与RA滑膜炎症及骨侵蚀病理过程,表现出与全身作用相反的“致炎”特性。在RA滑膜组织中以脂联素受体1(Adiponectinreceptor1,AdipoR1)优势表达为主,因此,本课题提出假说:关节中AD通过AdipoR1调控Th17细胞的表达,介导RA炎症反应。方法:诱导CIA模型,在二次免疫的同时关节腔内注射shAdipoR1慢病毒。流式细胞术及Real-time PCR检测关节组织中Th17细胞及其分化相关转录因子视黄酸相关的孤儿受体 γt(Retinoic acid receptor related orphan receptor γt,ROR-γt)比例的改变;Real-time PCR检测关节组织中IL-17 mRNA及分化相关的细胞因子IL-21 mRNA、IL-22 mRNA 和 IL-23 mRNA 的表达。结果:关节局部注射shAdipoR1后,CIA小鼠关节组织中Th17细胞及STAT3的比例显著降低,IL-17 mRNA 的表达明显下调。ROR-yt、IL-21 mRNA、IL-22 mRNA及IL-23 mRNA的表达较关节局部注射shNC组的CIA小鼠有升高趋势。结论:干扰AdipoR1能有显著降低关节组织中Th17细胞的比例,可能成为临床上治疗RA的新靶标。第三部分脂联素促进STAT3的表达参与调控Th17细胞分化机制的研究目的:在Th17细胞分化过程中,信号传导与转录激活因子(Signal transducer and activator of transcription,STAT)3是起核心作用的转录因子。通过前面的工作基础,我们已证实AD能促进naive T细胞向Th17细胞分化。在本部分实验中,我们将探讨AD调控Th17细胞分化是否依赖于STAT3及其机制。方法:诱导CIA模型,首次免疫后17、20及23天关节腔内注射AD,免疫组化及Real-time PCR检测关节组织中STAT3表达的变化。CIA小鼠关节局部沉默AdipoR1后,流式细胞术及Real-time PCR观察关节组织中STAT3表达的改变。分离naive T细胞,在Th17细胞分化过程中加入STAT3抑制剂,观察AD对Th17细胞分化的调控。采用流式细胞术、Real-time PCR、双荧光素酶报告基因观察在Th17细胞分化过程中AD对STAT3磷酸化、启动子区转录活性及miR-21表达的影响。结果:CIA小鼠关节局部高表达AD后,关节组织中STAT3表达增高;局部沉默AdipoR1后,STAT3的表达显著降低。在体外培养中,AD能部分逆转STAT3抑制剂对Th17细胞分化的抑制作用主要通过:1)影响STAT3启动子区转录活性;2)下调miR-21的表达;3)促进STAT3磷酸化三种途径。结论:RA炎性关节局部高表达的AD通过作用于STAT3调控Th17细胞分化。