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本论文选用烟草脆裂病毒(TRV)和烟草为实验材料,选择烟草八氢番茄红素去饱和酶基因(PDS)作为报告基因,以该基因沉默产生的植物叶片出现典型的光漂白现象,进行观察。构建八氢番茄红素去饱和酶基因(PDS)的病毒载体,侵染结果显示目的基因PDS沉默导致烟草幼苗出现光漂白现象.采用RT-PCR的方法检测目的基因PDS的沉默效果.结果显示PDS基因mRNA被显著降解。该体系的建立有利于将来对植物基因进行高通量功能分析。
根部吸收法操作简单,快速有效。通过用含有病毒载体的农杆菌直接侵染植物的根部,在短期内,被侵染的植物就能发生目的基因的沉默。此方法可对注射法无法接种的更小幼苗进行接种,因此适用的植物范围更广,适用于大规模基因功能分析。
为了使VIGS技术大规模应用于植物基因功能研究,以及探讨VIGS技术用于植物发育相关基因功能研究的可行性,本实验对农杆菌介导的病毒诱导基因沉默体系进行了优化,探讨了农杆菌的接种浓度,接种植物的苗龄对病毒诱导基因沉默效率的影响。结果显示一定范围内农杆菌接种浓度(OD值为0.6-2.0)对VIGS效率影响不明显。6叶龄植株是最佳接种时期,当接种苗龄大于6周的幼苗,无法诱导相关基因沉默。