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1 目 的 将蒙药那如三味丸由水丸改制成巴布剂,即由口服剂型改为经皮给药剂型;探讨那如-3 巴布剂组方药物的透皮吸收特性及促进那如-3 巴布剂透皮吸收的机理;比较那如三味丸口服给药与那如-3 巴布剂经皮给药不同给药途径吸收后的血药浓度;观察那如-3 巴布剂治疗大鼠佐剂性关节炎的疗效,探讨那如-3 巴布剂改善类风湿性关节炎症状、治疗类风湿性关节炎的抗炎镇痛机理。 2 方 法 2.1 用水煎、大孔树脂分离法提取制备草乌提取物;用醇提法提取制备荜茇浸膏;用水煎过滤提取法提取制备诃子浸膏。 2.2 用高效液相色谱(HPLC)法测定草乌提取物中新乌头碱和乌头碱含量、荜茇浸膏中胡椒碱的含量。 2.3 用改良 Franz 扩散池法收集草乌提取物、荜茇浸膏透皮接受液和那如-3 巴布剂的透皮接受液,用 HPLC 法测定草乌提取物中新乌头碱和乌头碱、荜茇浸膏中胡椒碱的透皮扩散量和那如-3 巴布剂中新乌头碱和胡椒碱的透皮扩散量,计算透皮速率常数。 2.4 采用家兔颈动脉取血,乙醚萃取血样,HPLC 法测定血浆中新乌头碱、乌头碱和胡椒碱的含量,观察那如三味丸灌胃(口服)和那如-3 巴布剂腹部贴敷不同给药途径的血药浓度变化。 2.5 用弗氏完全佐剂(FCA)0.1ml 注射于 SD 雄性大鼠左后足跖皮下致炎,建立佐剂性关节炎(AA)模型。以足跖肿胀度、足跖肿胀抑制率、关节炎指数、继发性前肢肿胀和耳部红斑及尾部结节出现率、踝关节病理改变等为指标,观察那如-3 巴布剂的抗炎作用。 2.6 用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测大鼠血清的IL-1、TNFα和PGE2水平。 2.7 用醋酸致小鼠扭体测痛法测定小鼠的疼痛抑制率;用热板测痛法测定小鼠舔足潜伏期(时间),作为痛阈指标,观察那如-3 巴布剂的镇痛作用。 3 结 果 3.1 实验第一部分 蒙药那如-3 巴布剂的研制和透皮吸收特性研究 3.1.1 用水煎、大孔树脂分离法和醇提等提取方法提取制备出草乌提取物、荜茇浸膏和诃子浸膏。用 HPLC 法进行主要成分的含量测定,结果为每 g 草乌提取物中新乌头碱含量为 3.9470mg、乌头碱含量为 0.6898mg。每 g 荜茇浸膏中胡椒碱含量为 73.8239mg。 3.1.2 用改良Franz扩散池法和HPLC法测定草乌提取物中新乌头碱和乌头碱、荜茇浸膏中胡椒碱的透皮速率,结果:高、中、低浓度草乌提取物中新乌头碱的透皮速率分别为78.8052μg/cm~2·h、35.7333μg/cm~2·h、39.7052μg/cm~2·h;乌头碱的透皮速率分别为18.3909μg/cm~2·h、15.9628μg/cm~2·h、13.5627μg/cm~2·h。高、中、低浓度荜茇浸膏中胡椒碱的透皮速率分别为 265.5747μg/cm2?h、208.2002μg/cm2?h、176.5923μg/cm2?h。 3.1.3 以那如-3 巴布剂主药中的指标成分新乌头碱和胡椒碱的透皮速率为考察指标,比较二组分促透剂氮酮、丙二醇各为 2%、4%和 6%时的透皮速率。结果:氮酮、丙二醇2那如-3 巴布剂的透皮吸收特性及改善大鼠佐剂性关节炎病变的机理各为 4%时新乌头碱的透皮速率为最大,24h累计渗透量为 26.1781μg/cm2,高于 2%组和 6%组,三组比较差异显著(P<0.05)。氮酮、丙二醇各为 6%时胡椒碱的透皮速率为最大,24h累计渗透量为 199.2911μg/cm2,高于 2%组和 4%组,但三组比较差异不显著(P>0.05)。3.1.4 在对巴布剂基质初步优化的基础上,涂布制备出成品那如-3 巴布剂,并对部分质控指标进行测定。结果显示,那如-3 巴布剂的膏体含水量约 30%;粘度适中,剥离基本无残留,透气性好;高、中、低剂量那如-3 巴布剂的剥离强度分别为 3.75、3.89、4.16牛顿(N);拉力分别为 37.85、39.90、40.30 牛顿(N);皮肤追随性评分分别为 4.6、4.6、4.8 分,符合巴布剂皮肤追随性要求。3.1.5 对那如-3 巴布剂中草乌有效成分新乌头碱以及荜茇中的主要成分胡椒碱的透皮速率进行测定,结果:高、中、低剂量那如-3 巴布剂中新乌头碱的透皮速率为 8.1256μg/μg/cm2?h、7.7501μg/cm2?h、7.1239μg/cm2?h;胡椒碱的透皮速率为 93.7196μg/cm2?h;84.8898μg/cm2?h;76.6839μg/cm2?h。3.2 实验第二部分 那如-3 巴布剂和口服剂不同给药途径的血药浓度测定3.2.1 用 HPLC 法测定口服(灌胃)给药那如三味丸和透皮给药那如-3 巴布剂后家兔血中的新乌头碱含量,结果:灌胃给药后 1h 血浆含量为 0.1079μg/ml,在 6h 达到高峰,为 1.0567μg/ml,至 24h 已降至 0.1993μg/ml。那如-3 巴布剂透皮给药后 1h 还检测不到血中的新乌头碱,6h 为 0.6375μg/ml,12h 为 0.7110μg/ml,至 24h 为 1.0730μg/ml 。3.2.2 用 HPLC 法测定口服(灌胃)给药那如三味丸和透皮给药那如-3 巴布剂后家兔血中的胡椒碱含量,结果:灌胃给药后 1h 血浆含量为 2.2143μg/ml,在 3h 达到高峰,为 25.0140μg/ml,6h 为 20.1719μg/ml,以后很快下降,至 24h 已降至 0.9435μg/ml。那如-3 巴布剂透皮给药后 1h 还检测不到血中的胡椒碱,3h 时血浆中胡椒碱的含量为4.8668μg/ml,6h 为 7.0277μg/ml,12h 为 7.4760μg/ml,至 24h 为 8.1269μg/ml。3.3 实验第三部分 那如-3 巴布剂的抗炎镇痛作用观察及机理研究3.3.1 用弗氏完全佐剂(FCA)0.1ml 注射于 SD 雄性大鼠左后足跖皮下致炎,成功建立佐剂性关节炎(AA)模型,实验各组大鼠出现典型