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乙型肝炎病毒剪接特异性蛋白（hepatitis B spliced protein，HBSP）由2447nt-489nt单剪接型2.2Kb HBV剪接变异体编码产生，与病毒的致病性及持续性感染相关，但其具体机制尚未阐明。本研究首先利用经典的细胞核酵母双杂交筛选与HBSP相互作用的肝细胞蛋白，共获得1166个阳性克隆，进一步在酵母体内进行验证，去除假阳性和重复克隆后共得到金属硫蛋白（metallothionein-2，MT2），乙醇脱氢酶（alcohol dehydrogenase1A(class I)， alpha polypeptide，ADH1A），tRNA剪接内切酶（tRNA-splicing endonuclease subunit34，TSEN34），乙酰辅酶A酰基转移酶（acetyl-CoAacyltransferase2，ACAA2)等38个与HBSP相互作用的猎物蛋白。选取乙醇脱氢酶1A（ADH1A）验证其与HBSP在哺乳动物细胞体内外的相互作用。为此，构建pGEX-4T-1-HBSP载体，转化大肠杆菌并纯化获得GST-HBSP融合蛋白，以RT-PCR技术从HepG2细胞扩增得到ADH1A全长基因，构建pCMVTNT-ADH1A载体，体外转录翻译出ADH1A蛋白，GST pull-down实验证实ADH1A蛋白可以和HBSP体外相互作用。将HBSP重组腺病毒感染肝癌细胞株，进行内源性免疫共沉淀实验，证实HBSP和哺乳动物细胞内源性ADH1A具有相互作用。本研究为今后进一步探讨HBSP致病性奠定基础。