论文部分内容阅读
本文研究了纳豆菌糖肽(BNGP),对正常状态及脂多糖(LPS)激活状态巨噬细胞的免疫调节作用及其相关机制,采用不同浓度的BNGP单独处理或LPS和不同浓度的BNGP共同处理RAW264.7巨噬细胞,检测各项指标,研究结果如下:1、从小鼠腹腔中分离、培养小鼠腹腔巨噬细胞,采用噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞增殖作用,中性红吞噬试验检测吞噬能力,Griess试剂检测细胞培养上清液中NO含量,酶联免疫分析法(ELISA)检测细胞培养上清液中细胞因子(IL-1β、TNF-α)、促炎介质(PGE2)含量。试验结果显示:纳豆菌糖肽(BNGP)在31.25-500μg/mL浓度范围内对小鼠腹腔巨噬细胞的代谢活力均有显著提升作用,在62.5-500μg/m L浓度范围内对细胞分泌NO、IL-1β、TNF-α、PGE2有显著的促进作用,并呈现出一定的剂量相关性,其中BNGP浓度为500μg/mL时促进作用最大。当细胞处于LPS激活状态时,BNGP在62.5-500μg/m L浓度范围内能协同LPS增强巨噬细胞的吞噬能力,但能抑制IL-1β、TNF-α、PGE2的分泌,而对NO的分泌无显著影响。2、培养RAW264.7巨噬细胞,采用噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞增殖作用,中性红吞噬试验检测吞噬能力,Griess试剂检测细胞培养上清液中NO含量,酶联免疫分析法(ELISA)检测细胞培养上清液中细胞因子(IL-1β、TNF-α)、促炎介质(PGE2)含量,Western Blot检测COX-2和iNOS蛋白表达水平。试验结果表明:BNGP在62.5-500μg/m L浓度范围内能提高正常状态的RAW264.7巨噬细胞的代谢活力,增加NO、IL-1β、TNF-α、PGE2的分泌量,提高COX-2和iNOS的表达量,高浓度(>125μg/mL)能增强巨噬细胞的吞噬能力;当细胞处于LPS激活状态时,BNGP在62.5-500μg/mL浓度范围内能抑制IL-1β、TNF-α、PGE2的分泌,浓度为500μg/m L时可抑制NO的产生及iNOS的表达,高浓度(>125μg/m L)则能下调COX-2的表达。3.采用流式细胞术分析BNGP对LPS-FITC与RAW264.7巨噬细胞表面受体结合的干扰作用,免疫荧光分析BNGP对NF-κB p65核转位的影响,Western blot检测BNGP对NF-κB p65在细胞质及细胞核的表达,对NF-κB的抑制性蛋白IκB-α磷酸化的影响。结果显示:(1)500μg/m L BNGP能极显著减少FITC-LPS结合到巨噬细胞上的量。(2)62.5-500μg/m L BNGP组的发生核转位的细胞比例均极显著高于对白对照组;高浓度BNGP(500μg/mL)能显著减少由LPS诱导发生核转位的细胞比例,而低浓度BNGP(≤250μg/m L)则与LPS组无显著差异。(3)BNGP单独作用于细胞时,可剂量依赖性地激活NF-κB从胞质转移入核;BNGP与LPS共同作用时,能够弱化由LPS刺激细胞引起的NF-κB剧烈的核转位现象。(4)BNGP能促使细胞质中与NF-κB结合的IκB-α蛋白发生磷酸化作用;BNGP与LPS共同作用时,能抑制由LPS引起的大量IκB-α蛋白发生磷酸化作用。