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目的:研究细胞外信号调节激酶(ERK-1/2), MMP-2,MMP-9在自体移植静脉中的表达及ERK-1/2与MMP-2,MMP-9之间变化的相互关系。 方法:采用3+0.5 kg成年健康大白兔45只,随机分为正常组3只(Control组),手术组42只。手术组建立自体颈外静脉翻转行颈动脉转流手术模型,其中一组是将颈外静脉置于含0.8%DMSO的缓冲液中培养30min后吻合在颈总动脉上(VG组),而另一组是将静脉置于含80μmol/l U0126的缓冲液中培养30min后再吻合到颈总动脉上(VG/UO组)。分别与术后1h,3h,1d,3d,7d,14d,28d牺牲大白兔,获取实验段血管,正常组直接取颈外静脉。采用HE染色观察血管组织以及细胞的结构变化、采用 Western-Blot方法检测ERK-1/2,P-ERK-1/2,PCNA,MMP-9,MMP-2蛋白的表达。 结果: 1、动物模型建立成功,移植静脉血流通畅 2、HE染色见:术后3d VG组移植静脉桥较VG/UO、control组有明显内皮损伤,7d有新生内膜形成,平滑肌细胞增生,14d、28d新生内膜进一步增厚,平滑肌细胞变性,表型改变,有明显的平滑肌向内皮侧迁移,而VG/UO组内膜较完整,未见明显的平滑肌细胞向内皮侧迁移。 3、Western blot检测ERK-1/2,P-ERK-1/2,PCNA,MMP-2,MMP-9结果 3.1、P-ERK-1/2的表达:(a)VG组静脉移植后30min,P-ERK1/2蛋白表达明显增强,与正常静脉比较差异有显著性(P<0.05),在移植3h和3d表达达高峰,呈现双峰现象,与其余时点比较差异有显著性(P<0.01),28d后恢复接近正常水平。(b)VG/UO组移植静脉P-ERK1/2蛋白表达明显减少,术后未见明显的活化高峰,在术后28d后仅有极少量的表达,与Control组静脉P-ERK1/2蛋白表达差异无统计学意义(P>0.05)。 3.2、 PCNA蛋白的表达:(a)VG组静脉移植术后3h开始有明显的蛋白表达,随后表达逐渐增多,与Control组静脉PCNA蛋白比较差异有显著性(P<0.05), VG组PCNA与P-ERK1/2表达呈正相关(P<0.01)。(b)VG/UO组PCNA蛋白表达明显下调,Control组静脉PCNA蛋白比较差异无统计学意义(P>0.05)与在术后28d表达基本上消失. 3.2、MMP-9蛋白的表达:(a)Control组移植静脉MMP-9蛋白有少量表达。(b)VG组移植静脉MMP-9蛋白在移植术后3h表达就开始增加,与Control组比较差异有统计学意义(P<0.05),在移植后1d达到高峰,与本组其余时点比较差异显著(P<0.05),表达随后逐渐降低,在28d降至基础水平。(c)VG/UO组移植静脉中MMP-9蛋白的表达明显下调,仅在术后3d有少量表达,也未见明显的高峰发现,在14d MMP-9蛋白的表达几乎消失,全时点表达与Control组比较差异无显著性(P>0.05),VG组与VG/UO组移植静脉中MMP-9蛋白在相同时段的表达有明显差异(P<0.05)。 3.4、MMP-2的表达:(a)Control组移植静脉MMP-2蛋白几乎没有表达(b)VG组移植静脉MMP-2蛋白表达从术后1d开始增加,增加呈时间依赖性,增加一直持续至术后28d。(c)VG/UO组MMP-2蛋白表达明显减少,仅在术后3d开始有少量表达,至28d基本消失,与control组比较无统计学意义(P>0.05).VG组和VG/UO组MMP-2蛋白表达在相同时段比较有明显差异(P<0.05)。 结论: (1)ERK-1/2的激化可能是内膜增生的关键环节,通过抑制ERK1/2的活化可以抑制内膜增生,阻止移植血管再狭窄; (2)血管重塑使移植静脉发生了形态结构和功能的动态变化,其结构变化包括细胞增殖、死亡、迁移以及细胞外基质(ECM)的合成和降解,MMP-2, MMP-9的活化参与血管再狭窄过程; (3)ERK-1/2活化介导移植静脉动脉化诱导的MMP-2,MMP-9表达的上调。ERK-1/2诱导的MMP表达的上调可以被ERK-1/2抑制剂UO126有效的抑制。通过对ERK-1/2在移植静脉再狭窄中的研究可以在药理学方法为我们提供在静脉转流手术中的有效的抑制再狭窄的方法和药物。