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本研究分为三部分： 第一部分：1，25(OH)2D3对高糖诱导的INS-1细胞的氧化应激及Nrf2表达的影响 目的：明确髙糖诱导大鼠胰岛P细胞INS-1细胞系氧化应激的作用及对核受体-红系-2-相关因子(nuclearfactor-erythroid-2-relatedfactor2, Nrf2)活性的影响；观察不同浓度的1,25(OH)2D3对髙糖诱导的INS-1细胞的氧化应激及对N rf2活性的影响，明确其改善高糖诱导INS-1细胞氧化应激的最适浓度。 方法：体外培养大鼠胰岛P细胞INS-1细胞系，以不同浓度(5.5、11.1、15、25、35mmol/L)的葡萄糖干预,DCFH-DA探针检测各组INS-1细胞内活性氧（reactive oxygen species，ROS)的产生，Western blot检测氧化应激指标(4-HNE)、全细胞及细胞核Nrf2的表达。随后将细胞分为六个组进行干预，以不同糖浓度（N G:11.1mmol/L;HG:25mmol/L)单独或联合不同浓度（10-9、10-8、10-7、10-6mol/L)的1,25(OH)2D3干预INS-1细胞，检测ROS及氧化应激指标的表达，同时检测各组全细胞及细胞核Nrf2的表达。 结果：随着糖浓度的增加，INS-1细胞内ROS及4-HNE表达逐渐增加，此外，全细胞及细胞核内N rf2的表达也逐渐增加。l,25(OH)2D3可剂量依赖性抑制高糖诱导INS-1细胞的氧化应激。与HG组相比，1,25(OH)2D3能剂量依赖性增加全细胞及细胞核内Nrf2的表达。 结论：H G可诱导大鼠INS-1细胞的氧化应激，1,25(OH)2D3可剂量依赖性抑制高糖诱导的胰岛P细胞氧化应激，且可能与激活Nrf2有关。 第二部分：1，25(OH)2D3单独或联合VDR沉默对高糖诱导的INS-1细胞氧化损伤的影响及机制 目的：慢病毒转染获取稳定沉默VDR的胰岛P细胞；明确25(OH)2D3抗高糖诱导的INS-1细胞的氧化损伤是否通过VD/VDR经典途径，且是否与调控Nrf2系统活性有关；明确1,25(OH)2D3调控Nrf2系统活性与GSK-3β/Fyn通路的关系。 方法： VDR重组慢病毒转染大鼠胰岛P细胞，嘌呤霉素筛选出稳定转染的细胞。通过qRT-PCR及Western blot检测VDR表达情况以筛选最佳有效序列。细胞先以NG、HG、1,25(OH)2D3单独或联合VDR沉默细胞，以DHE超氧阴离子荧光探针检测各组细胞内的超氧阴离子水平，Western blot检测各组细胞氧化应激及调亡指标、Nrf2抗氧化系统及GSK-3β/Fyn通路的指标，qRT-PCR检测各组Nrf2下游基因血红素加氧酶（Heme Oxygenase-1， HO-1)、NADPH-醒氧化还原酶-1(NADPH-Quinone Oxidoreductase-1, NQ01) mRNA的表达。随后，我们以HG、1,25(OH)2D3单独或联合Nrf2 siRNA干预 INS-1细胞,Western blot检测各组细胞内氧化应激指标及Nrf2抗氧化系统指标;最后以NG、HG、1,25(OH)2D3单独或联合GSK-3P抑制剂氯化锂(Lithium chloride, Licl)干预INS-1细胞，Western blot检测GSK-3β/Fyn通路指标及全细胞、细胞核中Nrf2的表达。 结果：M O I为50时其转染效率最佳。Wester blot及qRT-PCR检测V D R表达可达70%以上。1,25(OH)2D3可明显抑制H G诱导的INS-1细胞氧化损伤，增加N rf2在细胞核内的表达并促使其下游靶基因的表达;V D R沉默后上述作用减弱。Nrf2 siRNA干预可明显抑制1，25(OH)2D3在H G下对INS-1细胞的抗氧化应激作用。1,25(OH)2D3可在髙糖状态下抑制INS-1细胞的GSK-3β/Fy n通路活性。另外对于高糖诱导的INS-1细胞，GSK-3β通路抑制剂氯化锂（lithium chloride, Licl)可抑制GSK-3β/Fyn通路并增强Nrf2抗氧化系统活性，1,25(OH)2D3对于髙糖干预的INS-1细胞具有与GSK-3β抑制剂类似的作用。 结论：Lenti-shVDR可有效沉默VDR的表达。1,25(OH)2D3可在体外通过VD/VDR经典途径抑制高糖导致的INS-1细胞的氧化应激及凋亡，且与经GSK-3β/Fyn通路调控Nrf2抗氧化系统活性有关。 第三部分：1，25(OH)2D3单独或联合VDR沉默对糖尿病大鼠胰腺组织的氧化损伤的干预作用及其机制。 目的：探讨1,25(OH)2D3单独或联合VDR沉默对大鼠胰腺组织氧化损伤的作用及机制。 方法：60只SD大鼠，随机分为以下五组：对照组（NG组)，单纯糖尿病组（DM组)，糖尿病+1,25(OH)2D3组（DM+VD组)，糖尿病+1,25(OH)2D3+Lenti-shVDR组（DM+VD+Lenti-shVDR组），糖尿病+Lenti-shVDR组（DM+Lenti-shVDR组)，每组12只。采用单次腹腔注射链脲菌素（STZ)的方法建立糖尿病大鼠模型，全自动生化仪及ELISA法检测一般生化指标，免疫组化检测8-羟基脱氧鸟苷(8-hydroxy-2deoxyguanosine,8-OHDG)及Nrf2在各组大鼠胰腺组织中的表达；Western blot检测VDR,氧化应激、凋亡、Nrf2抗氧化系统及GSK-3β/Fyn通路的指标，qRT-PCR检测各组大鼠VD R、HO-1及NQ01的表达。 结果：成功构建各组大鼠模型。1,25(OH)2D3干预对DM所致的血糖升髙有改善的趋势，但是较单纯DM组无明显统计学差异。1,25(OH)2D3干预可明显改善D M引起的糖化血红蛋白的升髙。DM、DM+VD+shVDR、DM+shVDR组大鼠胰腺组织氧化应激及凋亡水平较NG组明显升髙，而1,25(OH)2D3干预可明显降低上述相关指标。此外，与DM组相比，1,25(OH)2D3干预后Nrf2抗氧化系统活性升高，GSK-3β/Fyn活性降低，VDR沉默后该作用消除。 结论：STZ单次腹腔注射可成功构建糖尿病大鼠模型；重组慢病毒能有效的转染糖尿病大鼠并使之稳定沉默VDR。1，25(OH)2D3可通过VD/VDR途径抑制DM大鼠胰腺组织的氧化损伤，且该作用和GSK-3β/Fyn通路与Nrf2抗氧化系统交互作用有关。