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第一章ADAM17 shRNA对HT29人结肠癌细胞迁移侵袭的影响及机制探究目的探讨沉默解聚素-金属蛋白酶17（ADAM17）基因的表达对HT29人结肠癌细胞迁移、侵袭运动能力的抑制作用及其可能机制。方法将HT29结肠癌细胞分为ADAM17 shRNA组（干扰组）、nonsense组（阴性对照组）和control组（空白对照组）,干扰组细胞转染重组慢病毒载体以沉默ADAM17基因的表达,阴性对照组细胞转染阴性对照重组慢病毒载体,空白对照组细胞加入与重组慢病毒载体体积等量的PBS溶液。采用实时荧光定量PCR法（real-time quantitative PCR）检测ADAM17 mRNA的表达,单层细胞划痕损伤修复实验检测沉默ADAM17基因表达后,细胞迁移能力的变化;Transwell体外侵袭实验检测沉默ADAM17基因表达后,细胞侵袭能力的改变。采用Western blot法检测ADAM17、基质金属蛋白酶2（matrix metalloproteinase,MMP-2）、基质金属蛋白酶9（matrix metalloproteinase,MMP-9）、细胞外调节蛋白激酶（extracellular regulated protein kinases,ERK）蛋白的表达。结果经慢病毒转染处理后的HT29细胞ADAM17的表达被明显抑制（P<0.01）;划痕实验和Transwell体外侵袭实验结果显示,与空白对照组相比,沉默ADAM17基因的表达后,HT29人结肠癌细胞的迁移和侵袭能力被抑制（P<0.01）;沉默ADAM17基因表达后,与空白对照组和阴性对照组细胞相比,干扰组细胞MMP-9、MMP-2蛋白的表达水平明显下调、P-ERK1/2蛋白的表达水平下降（P<0.01）,但是ERK1/2蛋白的表达水平较空白对照组和阴性对照组相比无明显差异（P>0.05）。结论1沉默ADAM17基因的表达可以抑制HT29人结肠癌细胞的迁移、侵袭运动能力。2 ADAM17可能通过抑制ERK通路的激活,从而下调MMP-9、MMP-2蛋白的表达,进而影响细胞迁移、侵袭能力。第二章ADAM17 shRNA诱导HT29人结肠癌细胞增殖凋亡的机制探究目的探讨沉默ADAM17基因的表达对HT29结肠癌细胞增殖影响和凋亡的抑制作用及其可能机制。方法将HT29人结肠癌细胞分为ADAM17 shRNA组（干扰组）、nonsens组（阴性对照组）和control组（空白对照组）,干扰组细胞转染重组慢病毒载体（ADAM17 shRNA）以沉默ADAM17基因的表达,阴性对照组细胞转染阴性对照重组（nonsense RNA）慢病毒载体,空白对照组细胞加入与重组慢病毒载体体积等量的PBS溶液。采用实时荧光定量PCR法（real-time quantitative PCR）检测ADAM17 mRNA的表达,采用Western blot法检测ADAM17、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3（caspase3）、磷酸化蛋白激酶B（phospho-protein kinase B,P-Akt）、蛋白激酶B（protein kinase B,Akt）、磷酸化糖原合成酶激酶-3（phospho glycogen synthase kinase 3β,P-GSK3β）、糖原合成酶激酶-3（glycogen synthase kinase 3β,GSK3β）蛋白的表达,采用MTT法检测细胞增殖能力的变化,采用Annexin-V-FITC/PI试剂盒,通过流式细胞仪检测细胞凋亡和细胞周期的变化情况。结果与阴性对照组和空白对照组细胞比较,干扰组细胞中ADAM17 mRNA及其蛋白的表达水平均较低（同实验第一部分）,在同时点（培养24h、48h及72h）阴性对照组和空白对照组细胞的吸光度（OD）值也较干扰组细胞高;干扰组细胞凋亡率较高,且细胞明显阻滞于G0/G1期（P<0.05）。干扰组caspase3蛋白的表达水平较高（P<0.05）,p-Akt和p-GSK3β蛋白的表达水平均较低,差异均有统计学意义（P<0.05）。Akt和GSK3β表达水平较空白对照组和阴性对照组细胞相比无明显差异（P>0.05）。结论1沉默ADAM17基因的表达可以抑制结肠癌细胞增殖并诱导凋亡,同时可以将细胞阻滞于G0/G1期。2沉默ADAM17基因的表达可能是通过抑制Akt/GSK3β通路的激活,发挥诱导细胞凋亡和调控细胞周期的作用。