脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS),又称内毒素,是革兰氏阴性菌细胞壁的主要成分,能引起败血性休克和多器官功能衰竭综合症。脂多糖由类脂A、核心寡糖和O-抗原三部分组成。其中,类脂A是脂多糖的活性部分,O抗原的结构组成高度变化,这种变化决定了脂多糖的多样性。而脂多糖的多样性与其鲎试剂检测活力之间的关系是我们非常想了解的。本文通过提取纯化不同致病能力大肠杆菌中的脂多糖,使用鲎试剂测定它们的活力,并比较它们活力的差异,了解不同菌株致病力的强弱与其脂多糖的鲎试剂活力测定之间的关系,为进一步比较不同脂多糖引起的信号转导通路的差异提供实验基础,为人们研究和治疗脂多糖引起的各种疾病提供新的思路和方法。 本文选取不同致病能力的21种大肠杆菌,采用热酚-水法提取它们的脂多糖,纯化后的脂多糖用SDS-PAGE电泳和银染检测。得到脂多糖的蛋白含量除O157:H7为1.08％外,其余均低于1％；核酸含量介于1.46％和17.11％之间；产率在6.16 mg/g和34.38 mg/g之间；用鲎试剂测定的活力从107到1013 EU/mg不等。 本文还构建了含有基因启动子序列的六个报告基因质粒,这些基因包括IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α、iNOS和IRF-3,其中IL-1β、IL-6、IL-8和TNF-α是脂多糖引起的MyD88依赖性信号通路中的炎症因子,iNOS和IRF-3是MyD88非依赖性信号通路中的重要调节蛋白。这些报告基因质粒的构建为研究不同脂多糖刺激下相应基因的表达做好了准备。