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真菌漆酶(Laccase，EC.1.10.3.2)是一种含铜的多酚氧化还原酶，具有降解木质素、去除酚类和芳胺类化合物毒性等作用，在环境保护、造纸工业、食品工业上具有广阔的应用前景。本研究采用改良的cDNA-AFLP技术克隆灵芝TR6号菌株漆酶差异表达相关基因片段，通过Blast比对，并用半定量RT-PCR方法检测，初步探讨了漆酶基因表达的调控机制。
1.在进行预扩增和选择性扩增时，连接产物稀释5倍，预扩增效果最好；预扩增产物稀释10倍，选择性扩增的效果最好；
2.EcoRⅠ单酶切cDNA-AFLP，获得了13条差异片段，AseⅠ单酶切cDNA-AFLP，得到了34条，共获得了47条差异片段，其中有33条可以找到同源性序列，编码20种不同的功能蛋白。这些蛋白可以分为7个功能组：①与漆酶功能类似的蛋白(PRE1、PRA1、PRA3、PRA4、PRA6、PRA21、PRA24、PRA34)；②影响漆酶活性的蛋白(PRE12)；⑨代谢相关的蛋白(PRE11、PRE13、PRA16、PRA17)；④信号传导相关蛋白(PRA5、PRA8、PRA25、PRA33)；⑤表达调控蛋白(PRE2、PRE3、PRE4、PRE8、PRE10、PRA2、PRA22、PRA28)；⑥转运功能蛋白(PRA11、PRA12、PRA32)；⑦DNA修复功能蛋白(PRA23)。其中锌指蛋白、细胞周期依赖蛋白、钙离子转运蛋白、接触反应亚基、转录催化因子、泛素、尿素酶、丝/苏氨酸激酶是对菌株产酶有积极作用的转录调控蛋白；与代谢相关的蛋白和信号传导蛋白如过氧化酶、金属依赖脱氢酶、乙醇脱氢酶等，主要是对菌株的生长进行调节，间接的在DNA水平起调控作用；剩余的片段在NCBI上没有找到同源性序列，其在漆酶基因表达调控方面的作用目前难以判断。
3.采用半定量RT-PCR方法，鉴定了TR6号菌株3个特异片段(PRA3、PRE4、PRA12)在培养的第8d、第12d、第16d的表达情况及其与漆酶基因表达的关系。结果表明，PRA3(编码细胞色素氧化酶)只在不含铜离子、低漆酶酶活的培养基中表达，其表达量与漆酶基因的表达量成负相关；PRE4(编码细胞周期依赖蛋白激酶)只在含铜离子、胰蛋白胨为氮源、高漆酶酶活的培养基中表达，其表达量与漆酶基因的表达量成正相关；PRA12(编码一种与代谢相关的、维持细胞内氧化还原平衡的金属离子转运酶)，只在含铜离子的培养基中表达，与铜离子的作用有关，其表达量与漆酶基因的表达量成一定程度的正相关。